[发明专利]一种百两金皂苷B原料或其制剂的检测方法

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及药品的质量控制方法，具体是指百两金皂苷B原料或其制剂的分析检测方法。

背景技术

百两金皂苷B的化学名称为西克拉敏A3-O-α-鼠李吡喃糖-(1→2)-β-D-葡萄吡喃糖-(1→4)-[β-D-葡萄吡喃糖-(1→2)-]-α-L-阿拉伯吡喃糖苷，是存在于紫金牛科紫金牛属植物百两金、朱砂根、红毛走马胎等多种植物中的有效成分，具有细胞毒活性和抗肿瘤、抗炎等药理作用。在深入研究开发该活性成分的过程中，需要将其提取制备成含量大于90％的中药1类新药原料，并进而制备成制剂。目前未见百两金皂苷B原料药及其制剂的定量分析方法，为深入探讨本品的成药性及药理活性，我们从该药材中提取分离得到百两金皂苷B单体，并按照对照品研究技术指导原则进行了纯化及结构鉴定。本发明采用高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD)建立起百两金皂苷B原料或其制剂的定量分析方法，为进一步的深入研究和新药开发提供新的分析手段和参考数据。

发明内容

本发明提供一种使用高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD)测定百两金皂苷B原料或其制剂的定量分析方法，其特征在于以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为30∶70～40∶60乙腈-水为流动相；用蒸发光散射检测器检测，理论板数按百两金皂苷B计算不得低于5000；其主要步骤包括色谱系统适用性试验、对照品和样品溶液制备、进样分析测定并计算含量。

根据前述的检测方法，其中，所述百两金皂苷B原料采用如下方法制备：将百两金粉碎，用50％～80％的乙醇提取，将提取液减压浓缩，上大孔吸附树脂，分别用水和30％乙醇冲洗除杂，再用80％乙醇洗脱，洗脱液减压浓缩干燥，上硅胶柱层析，以体积比为70∶30的乙酸乙酯-甲醇洗脱，合并富含百两金皂苷B的流份，除去溶剂，甲醇重结晶，干燥、即得；其制剂为百两金皂苷B原料用常规工艺制备而成的胶囊或片剂。

根据前述的检测方法，其中，所述百两金皂苷B对照品是采用制备型高效液相色谱仪对百两金皂苷B原料进行分离纯化而得，其制备的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；体积比为60∶40～70∶30的甲醇-水为流动相；在205nm波长下监测；其供试品采用制备液相使用的流动相配制成饱和溶液，取上清液进样，收集目标峰流出液，浓缩、干燥、检查纯度，即得。

根据前述的检测方法，其中，所述百两金皂苷B原料或其制剂的供试品溶液是用50％～70％的甲醇或乙醇水溶液作为溶剂提取。

根据前述的检测方法，其中，所述采用HPLC-ELSD法测定百两金皂苷B原料或其制剂含量的方法包括如下步骤和优化条件：

照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录VI D)测定：

色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水(35∶65)为流动相；蒸发光散射检测器检测，理论板数按百两金皂苷B计算不得低于4000。

对照品溶液制备取百两金皂苷B对照品适量，精密称定，加50％甲醇制成每1ml含0.3mg的百两金皂苷B对照品溶液，即得。

供试品溶液制备取百两金皂苷B原料30mg，精密称定，置100ml量瓶中，加入50％乙醇适量，超声处理使溶解，用50％乙醇稀释至刻度，摇匀，过滤或离心，取续滤液或上清液，即得。

测定方法分别精密吸取对照品溶液5μL、20μL；供试品溶液10μL；注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得。

本发明所提供的百两金皂苷B原料或其制剂中百两金皂苷B含量的HPLC-ELSD检测方法具有如下优点：

(1)本发明提供的方法首次引入了百两金皂苷B原料或其制剂中有效成分百两金皂苷B的含量测定，从而使百两金皂苷B的质量控制方法更加科学合理；

(2)本发明所提供的的百两金皂苷B原料或其制剂的分析方法首次将HPLC-ELSD法用于百两金皂苷B原料或其制剂中活性成分百两金皂苷B的含量测定，具有良好的线性关系、精密度、重复性、稳定性、耐受性和回收率，测定简便快速。

附图说明

图1为百两金皂苷B对照品溶液的HPLC-ELSD色谱图；

图2为百两金皂苷B原料的HPLC-ELSD色谱图；

图3为百两金皂苷B胶囊的HPLC-ELSD色谱图。

具体实施方式

1仪器、试药与样品