[发明专利]用于非酒精性脂肪肝相关目的基因多态性检测方法及其引物，以及试剂盒

说明书

本发明属于基因检测技术领域，具体涉及一种用于非酒精性脂肪肝相关目的基因多态性检测方法及其引物，以及试剂盒，本发明针对非酒精性脂肪肝相关目的基因提供检测方法和引物，本发明的基因引物具有相应的特异性，长度合适，转录高效，不会形成二级结构，引物自身少于连续4个碱基的互补，引物之间少于连续4个碱基的互补，引物端可以修饰，本发明检测方法具有以下特点第一，引物在PRC过程合成周期短，一周之内可以合成完毕；第二，可以做多重的SNP检测，降低了检测成本；第三，样本数量范围较宽，100到1000的样本量都很适合；第四，检测位点成功率和准确率>95％。

技术领域

本发明属于基因检测技术领域，具体涉及一种用于非酒精性脂肪肝相关目的基因多态性检测方法及其引物，以及试剂盒。

背景技术

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是指除外酒精和其他明确的损肝因素所致的，以弥漫性肝细胞大泡性脂肪变为主要特征的临床病理综合征，包括单纯性脂肪肝以及由其演变的脂肪性肝炎(NASH)和肝硬化，胰岛素抵抗和遗传易感性与其发病关系密切。随着肥胖和糖尿病的高发，NAFLD现已成为我国常见的慢性肝病之一，严重危害人民健康。

研究表明NAFLD与SNP有密切关系，所述的SNP是为单核苷酸多态性(singlenucleotide polymorphism，SNP)是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性。NAFLD发病通路中，有许多基因影响，然而检测这些基因多态性的方法有许多种，比如测序分析方法，但是其成本高，通量低，检测周期较长；又如核酸电泳法，其对样本要求高；还有TaqMan探针法，其对探针设计较复杂，设计周期长。

发明内容

本发明的第一个目的在于：提供一种用于非酒精性脂肪肝相关目的基因多态性检测方法的引物。

为了实现上述目的，本发明采用的方案如下：

用于非酒精性脂肪肝相关目的基因多态性检测方法的引物，

所述的相关目的基因为三类，分别为胰岛素敏感基因，参与氧化活性代谢和细胞因子通路基因，以及参与肝脏脂肪代谢基因；

所述的胰岛素敏感基因包括为PPARG基因、ADIPOQ基因、ADIPOR2基因；

所述的参与氧化活性代谢和细胞因子通路基因为FDFT1基因、TNF基因、AGTR1基因、PNPLA3基因；

所述的参与肝脏脂肪代谢基因为PEMT基因、MTTP基因；

所述的PPARG基因的引物其核苷酸序列SEQ ID NO：1

所述的ADIPOQ基因的引物其核苷酸序列SEQ ID NO:2

所述的ADIPOR2基因的引物其核苷酸序列SEQ ID NO:3

所述的FDFT1基因的引物其核苷酸序列SEQ ID NO:4

所述的TNF基因的引物其核苷酸序列SEQ ID NO:5

所述的AGTR1基因的引物其核苷酸序列SEQ ID NO:6

所述的PNPLA3基因的引物其核苷酸序列SEQ ID NO:7

所述的PEMT基因的引物其核苷酸序列SEQ ID NO:8

所述的MTTP基因的引物其核苷酸序列SEQ ID NO:9。

扩增引物核苷酸序列表如下

延伸引物核苷酸序列表如下