[发明专利]一种基于荧光分析的煎炸食品中丙烯酰胺的检测方法

权利要求书

1.一种基于荧光分析的煎炸食品中丙烯酰胺的检测方法，其特征在于包括以下步骤：

1)配制试剂：配制100μg/mL丙烯酰胺储备液、0.05g/mL聚合剂溶液、3mM光引发剂、10％荧光增敏剂、5mg/mL荧光胺溶液、0.1M的磷酸盐缓冲溶液；

所述聚合剂选自过硫酸钾、过硫酸铵、四甲基二乙胺中的一种；

所述光引发剂选自(2,4,6-三甲基苯甲酰基)二苯基氧化膦、2,4,6-三甲基苯甲酰基苯基膦酸乙酯、1-羟基环己基苯基甲酮、2-羟基-2-甲基-1-苯基丙酮、苯甲酰甲酸甲酯中的一种；

所述荧光增敏剂选自曲拉通Tx-100、十二烷基磺酸钠、环糊精中的一种；

2)检测条件优化，包括pH、聚合剂浓度、光引发剂浓度、荧光增敏剂浓度、荧光胺浓度的优化；

所述pH的优化方法为：将500μL 100μg/mL的丙烯酰胺溶液中加入到10μL 0.05g/mL聚合剂溶液中,同时加入100μL 2mM TPO溶液，混匀后放到波长为365nm和254nm的紫外灯下照射1h；随后加入200μL不同pH的PBS，接着再加入200μL 0.5mg/mL荧光胺溶液和480μL 10％荧光增敏剂溶液，混合均匀，在激发波长375nm条件下，测定体系在465nm处的荧光强度；

所述聚合剂浓度的优化方法为：将500μL 100μg/mL的丙烯酰胺溶液中加入到10μL浓度分别为0.001，0.005，0.01，0.03，0.05mg/mL五个浓度的聚合剂溶液中,同时加入100μL 2mM TPO溶液，混匀后放到波长为365nm和254nm的紫外灯下照射1h；随后加入200μL pH为8.0的PBS，接着再加入200μL 0.5mg/mL荧光胺溶液和480μL 10％荧光增敏剂溶液，混合均匀，在激发波长375nm条件下，测定体系在465nm处的荧光强度；

所述光引发剂浓度的优化方法为：将500μL 100μg/mL的丙烯酰胺溶液中加入到10μL0.03mg/mL聚合剂溶液中,同时加入100μL浓度分别为0.1，0.5，1.0，2.0，3.0mM五个浓度的TPO溶液，混匀后放到波长为365nm和254nm的紫外灯下照射1h；随后加入200μL pH为8.0的PBS，接着再加入200μL 0.5mg/mL荧光胺溶液和480μL 10％荧光增敏剂溶液，混合均匀，在激发波长375nm条件下，测定体系在465nm处的荧光强度；

所述荧光增敏剂浓度的优化方法为：将500μL 100μg/mL的丙烯酰胺溶液中加入到10μL 0.03mg/mL聚合剂溶液中,同时加入100μL 2mM TPO溶液，混匀后放到波长为365nm和254nm的紫外灯下照射1h；随后加入200μL pH为8.0的PBS，接着再加入200μL 0.5mg/mL荧光胺溶液和480μL浓度分别为0％，8％，10％，15％四个浓度的荧光增敏剂溶液，混合均匀，在激发波长375nm条件下，测定体系在465nm处的荧光强度；

所述荧光胺浓度的优化方法为：将500μL 100μg/mL的丙烯酰胺溶液中加入到10μL 0.03mg/mL聚合剂溶液中,同时加入100μL 2mM TPO溶液，混匀后放到波长为365nm和254nm的紫外灯下照射1h；随后加入200μL pH为8.0的PBS，接着再加入200μL浓度分别为0.1，0.3，0.5，1.0，5.0mg/mL五个浓度的荧光胺溶液和480μL 10％荧光增敏剂溶液，混合均匀，在激发波长375nm条件下，测定体系在465nm处的荧光强度；

3)丙烯酰胺的聚合及检测，具体方法如下：

将500μL不同浓度的丙烯酰胺溶液中加入到10μL聚合剂溶液中,同时加入100μL TPO溶液，混匀后放到波长为365nm和254nm的紫外灯下照射1h；随后加入200μL磷酸盐缓冲溶液PBS，pH 8，接着再加入200μL荧光胺溶液和480μL荧光增敏剂溶液，混合均匀，在激发波长375nm条件下，测定体系在465nm处的荧光强度。

2.如权利要求1所述一种基于荧光分析的煎炸食品中丙烯酰胺的检测方法，其特征在于在步骤1)中，所述100μg/mL丙烯酰胺储备液的配制方法为：称取10mg丙烯酰胺于10mL容器中，用超纯水溶解，然后定容到100mL容量瓶中，即得100μg/mL丙烯酰胺储备液；

所述0.05g/mL聚合剂溶液的配制方法为：称取5g聚合剂于50mL容器中，用超纯水溶解，然后定容到100mL容量瓶中，即得0.05g/mL聚合剂溶液；

所述3mM光引发剂的配制方法为：称取52.25mg光引发剂于10mL容器中，用无水乙醇溶解，并定容于50mL容量瓶中，即得3mM光引发剂；

所述10％荧光增敏剂的配制方法为：称取5g荧光增敏剂于50mL容器中，用超纯水溶解，并定容到50mL容量瓶中，即得10％荧光增敏剂；

所述5mg/mL荧光胺溶液的配制方法为：称取50mg荧光胺于10mL容器中，用丙酮溶解，并定容到10mL容量瓶中，即得5mg/mL荧光胺溶液；

所述0.1M的磷酸盐缓冲溶液的配制方法为：称取1.56g磷酸二氢钠二水合物于50mL容器中，用超纯水溶解，并定容到100mL容量瓶中；另称取3.581g磷酸氢二钠十二水合物于50mL容器中，用超纯水溶解，并定容到100mL容量瓶中；调节两者配比，配制pH分别为6.0，7.0，8.0，9.0，10.0的0.1M磷酸盐缓冲溶液。