[发明专利]检测肺癌KIF5B-RET融合基因的引物、试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.一种用于检测肺癌KIF5B-RET融合基因的引物，其特征在于，所述引物包括5对引物，可扩增KIF5B-RET融合基因的四种融合亚型和一个内参基因；

所述KIF5B-RET融合的四种融合亚型为：K15；R12亚型、K16；R12亚型、K22；R12亚型、K23；R12亚型；

特异性扩增K15；R12亚型的引物序列如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示，

SEQ ID NO:1 5’-AGACCTTGCAGAAATAGGAATTG-3’

SEQ ID NO:2 5’-TCCAAATTCGCCTTCTCCTA-3’

特异性扩增K16；R12亚型的引物序列如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示，

SEQ ID NO:3 5’-GAGTTAGCAGCATGTCAGCTTC-3’

SEQ ID NO:4 5’-TCCAAATTCGCCTTCTCCTA-3’

特异性扩增K22；R12亚型的引物序列如SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示，

SEQ ID NO:5 5’-CGCAAACTCTTTGTTCAGGA-3’

SEQ ID NO:6 5’-TCCAAATTCGCCTTCTCCTA-3’

特异性扩增K23；R12亚型的引物序列如SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8所示，

SEQ ID NO:7 5’-ATCTCCTTTCTTGAAAATAATCTTG-3’

SEQ ID NO:8 5’-TCCAAATTCGCCTTCTCCTA-3’

特异性扩增内参基因的引物序列如SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10所示，

SEQ ID NO:9 5’-CGCCCGCCGCGGCTTGTCCCGAGATGTTTAT-3’

SEQ ID NO:10 5’-CGCCCGCCGCCACAGCAGGACACCAAAAGA-3’。

2.一种包括有权利要求1所述引物的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括：分别装有用于检测肺癌KIF5B-RET融合基因四种融合亚型以及一种内参基因的5对引物的试剂管，引物序列如SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:10所示；装有荧光定量taq酶的试剂管；装有ROX染料试剂的试剂管；装有去离子水的试剂管；分隔并集中包装这些试剂管的包装盒。

3.按照权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：所述荧光定量taq酶为宝生物公司的Premix Ex TaqTM II(2×)试剂。

4.按照权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：所述所述ROX染料试剂为宝生物公司的ROX Reference Dye or Dye II(50×)试剂。

5.权利要求1所述引物的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)使用常规方法提取待测样本的RNA并进行反转录，得到cDNA；

(2)以步骤(1)得到的cDNA为模板，进行荧光定量PCR扩增，在扩增时，以确定携带相应KIF5B-RET融合基因亚型的样本为阳性对照，以去离子水为阴性对照；

(3)分析得到的检测数据和扩增曲线图。

6.按照权利要求1所述的引物在检测肺癌KIF5B-RET融合基因中的应用。

7.按照权利要求2～4中任一项所述的试剂盒在检测肺癌KIF5B-RET融合基因中的应用。