[发明专利]一种云纹石斑鱼微卫星标记Epinmoss的检测引物和方法

权利要求书

1.一组云纹石斑鱼微卫星标记Epinmoss的检测引物，其特征在于，所述引物序列为：

正链5’ -CGTGGATTATGCCTGAGAGTATAGT-3’，

负链5’- ATGCTCATGGATTAAGGCCCCTTGT-3’，用该标记时的退火温度为56℃;

其中微卫星标记Epinmoss的核心序列为：gtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtg tgtgtgtatggtgtgtgtgtgtgtgtgtgt。

2.一种云纹石斑鱼微卫星标记Epinmoss的检测方法，其特征在于，首先提取云纹石斑鱼血液中的基因组DNA并稀释备用；再利用云纹石斑鱼DNA序列中含有的微卫星核心序列，使用特异性引物对云纹石斑鱼不同个体的基因组DNA进行PCR扩增，对PCR产物进行变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，从而确定云纹石斑鱼不同个体在Epinmoss核心序列区的基因型，其中所述的云纹石斑鱼微卫星标记Epinmoss的特异性引物为：

正链5’ -CGTGGATTATGCCTGAGAGTATAGT-3’，

负链5’- ATGCTCATGGATTAAGGCCCCTTGT-3’，用该标记时的退火温度为56℃;

其中微卫星标记Epinmoss的核心序列为：gtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtg tgtgtgtatggtgtgtgtgtgtgtgtgtgt。

3.如权利要求2所述的云纹石斑鱼微卫星标记Epinmoss的检测方法，其特征在于，对不同云纹石斑鱼个体的基因组DNA进行的PCR扩增，其加样参数为：每个PCR反应总体积为25μl，包括100ng云纹石斑鱼基因组DNA；10×PCR Buffer，2.5μl；Mg²⁺ 1.5 mmol/L；Taq酶1u；dNTP 0.1mmol/L；权利要求2中的特异性引物各10 pmol；最后加ddH₂O至25μl；设置PCR仪的程序参数为：94℃变性2min；94℃ 30sec，56℃ 45sec，72℃ 40sec，该反应进行35个循环；72℃延伸5 min，4℃保存。

4.如权利要求2所述的云纹石斑鱼微卫星标记Epinmoss的检测方法，其特征在于，对PCR产物进行变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测的步骤：将PCR产物在8％的变性聚丙烯酰胺凝胶中以15W恒功率电泳1.5小时进行分离, 以10％的冰醋酸溶液浸泡30min，然后蒸馏水冲洗5min，再以0.1％的硝酸银溶液浸泡30min，用3％的碳酸钠溶液显色 5min，最后用10％的冰醋酸溶液浸泡5min。

5.权利要求2-4任意一项所述的方法在云纹石斑鱼群体间遗传多态性图谱构建上的应用。