[发明专利]一种病毒样颗粒的纯化方法

权利要求书

1.一种病毒样颗粒的纯化方法，其特征在于，包括：将含有病毒样颗粒的液体依次经蔗糖浓缩、凝胶层析、陶瓷羟基磷灰石层析。

2.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述陶瓷羟基磷灰石层析的平衡液为PBS缓冲液；其中NaCl的浓度为0.1mol/L～0.5mol/L；pH值为7.0～8.5。

3.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述陶瓷羟基磷灰石层析的洗脱液为PBS缓冲液；其中NaCl的浓度为1mol/L；pH值为7.0～8.5。

4.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述凝胶层析的填料为superdex-500；所述凝胶层析平衡液为PBS缓冲液；其中NaCl的浓度为0.2mol/L～0.5mol/L；pH值为7.0～8.5。

5.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述蔗糖浓缩具体为：将含有病毒样颗粒的液体与含有蔗糖的PBS缓冲液混合，27500rpm离心3～4小时；所述含有蔗糖的PBS缓冲液中蔗糖的质量分数为30％。

6.根据权利要求1～5任一项所述的纯化方法，其特征在于，所述病毒样颗粒为EV71病毒样颗粒或CVA16病毒样颗粒。

7.根据权利要求6所述的纯化方法，其特征在于，所述含有病毒样颗粒的液体的制备方法为：以含有CVA16或EV71目的基因的杆状病毒感染昆虫细胞，培养至30％～40％的细胞出现病变；离心收获细胞，经反复冻融后，离心去除残渣，经过滤制得含有病毒样颗粒的液体。

8.一种EV71病毒样颗粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1：将EV71病毒的P1片段和3CD片段构建入pFastBAcdual载体，与大肠杆菌DH10BAC转座重组，获得含有EV71目的基因的表达载体；

步骤2：以所述含有EV71目的基因的表达载体转染昆虫细胞，培养、传代获得含有EV71目的基因的杆状病毒；

步骤3：以所述含有EV71目的基因的杆状病毒感染昆虫细胞，培养至30％～40％的细胞出现病变；离心收获细胞，经反复冻融后，离心去除残渣，经过滤制得含有病毒样颗粒的液体；

步骤4：将所述含有病毒样颗粒的液体依次经蔗糖浓缩、凝胶层析、陶瓷羟基磷灰石层析；制得EV71病毒样颗粒。

9.如权利要求8所述制备方法制得的病毒样颗粒。

10.一种EV71病毒样颗粒疫苗，其特征在于，包括如权利要求8所述制备方法制得的病毒样颗粒和佐剂。

11.一种CVA16病毒样颗粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1：将CVA16病毒的P1片段和3CD片段构建入pFastBAcdual载体，与大肠杆菌DH10BAC转座重组，获得含有CVA16目的基因的表达载体；

步骤2：以所述含有CVA16目的基因的表达载体转染昆虫细胞，培养、传代获得含有CVA16目的基因的杆状病毒；

步骤3：以所述含有CVA16目的基因的杆状病毒感染昆虫细胞，培养至30％～40％的细胞出现病变；离心收获细胞，经反复冻融后，离心去除残渣，经过滤制得含有病毒样颗粒的液体；

步骤4：将所述含有病毒样颗粒的液体依次经蔗糖浓缩、凝胶层析、陶瓷羟基磷灰石层析；制得CVA16病毒样颗粒。

12.如权利要求11所述制备方法制得的病毒样颗粒。

13.一种CVA16病毒样颗粒疫苗，其特征在于，包括如权利要求11所述制备方法制得的病毒样颗粒和佐剂。