[发明专利]糖原磷酸化酶同工酶BB近红外荧光法检测试剂盒

权利要求书

1.一种糖原磷酸化酶同工酶BB近红外荧光法检测试剂盒，包括位于背板上的试剂条，试剂条从加样端开始依次为样品垫、标记有免疫荧光探针的玻璃纤维素膜、包被有抗糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体的硝酸纤维素膜和吸水纸，所述免疫荧光探针为抗糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体包被的近红外荧光乳胶微球颗粒；检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：1)用浓度为0.009-0.011mol/L、PH为7.25-7.35的磷酸盐缓冲液将荧光乳胶微粒离心清洗并将乳胶颗粒分散，在清洗好的乳胶颗粒分散液中加入抗糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体，乳胶颗粒、抗糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体、EDCA的重量比为9-11：0.9-1.1：0.9-1.1；加入EDCA使抗体与颗粒偶联；再加入乙醇胺封闭乳胶颗粒上多余的基团，并加入二环已基-18-冠-6，制备获得探针溶液，制备获得的探针溶液中冠醚的浓度为4-8mg/ml；2)将含有抗糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体的浓度为0.009-0.011mol/L、PH为7.25-7.35的PBS缓冲溶液喷加到硝酸纤维素膜上，烘干备用，含有抗糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体的缓冲溶液中还含有二环已基-18-冠-6，所述含有抗糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体的缓冲溶液中二环已基-18-冠-6的浓度为4-8mg/ml；3)将步骤1)制备获得的探针溶液浸润玻璃纤维薄膜，干燥备用；4)将步骤2)所得的硝酸纤维素膜、步骤3)所得的标记有免疫荧光探针的玻璃纤维素膜、样品垫、吸水纸及背板组装制备成糖原磷酸化酶同工酶BB近红外荧光检测试剂盒。

2.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述硝酸纤维素膜上包被的抗糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体和所述近红外荧光乳胶微球颗粒上包被的抗糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体为相同的抗糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体，或者为不同的抗糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体。

3.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述硝酸纤维素膜上包被的抗糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体为Anti-GPBB抗体[17B6]，所述近红外荧光乳胶微球颗粒上包被的抗糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体为Anti-GPBB抗体[17B6]，或所述硝酸纤维素膜上包被的抗糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体为Anti-GPBB抗体[17B6]，所述近红外荧光乳胶微球颗粒上包被的抗糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体为Anti-GPBB抗体[1G6]。

4.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述荧光乳胶微球颗粒的直径为140-160nm。

5.根据权利要求1-4任一权利要求所述的检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：

1)用浓度为0.009-0.011mol/L、PH为7.25-7.35的磷酸盐缓冲液将荧光乳胶微粒离心清洗并将乳胶颗粒分散，在清洗好的乳胶颗粒分散液中加入抗糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体，乳胶颗粒、抗糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体、EDCA的重量比为9-11：0.9-1.1：0.9-1.1；加入EDCA使抗体与颗粒偶联；再加入乙醇胺封闭乳胶颗粒上多余的基团，并加入二环已基-18-冠-6，制备获得探针溶液，制备获得的探针溶液中二环已基-18-冠-6的浓度为4-8mg/ml；

2)将含有抗糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体的浓度为0.009-0.011mol/L、PH为7.25-7.35的PBS缓冲溶液喷加到硝酸纤维素膜上，烘干备用，含有抗糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体的缓冲溶液中还含有二环已基-18-冠-6，所述含有抗糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体的缓冲溶液中冠醚的浓度为4-8mg/ml；

3)将步骤1)制备获得的探针溶液浸润玻璃纤维薄膜，干燥备用；

4)将步骤2)所得的硝酸纤维素膜、步骤3)所得的标记有免疫荧光探针的玻璃纤维素膜、样品垫、吸水纸及背板组装制备成糖原磷酸化酶同工酶BB近红外荧光检测试剂盒。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中，

含有抗糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体的缓冲溶液中抗糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体的浓度为1.8-2.2mg/ml；

和/或，抗糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体的缓冲溶液的喷加量为0.9-1.1ul/cm。

7.根据权利要求1-4任一权利要求所述的检测试剂盒在糖原磷酸化酶同工酶BB检测领域的用途。

8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述用途具体为使用所述糖原磷酸化酶同工酶BB近红外荧光法检测试剂盒对样品中的糖原磷酸化酶同工酶BB进行检测，所述样品选自人全血、血清或血浆中的一种或多种的组合。