[发明专利]糖原磷酸化酶同工酶BB近红外荧光法检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种糖原磷酸化酶同工酶BB近红外法荧光检测试剂盒及其用途。

背景技术

糖原磷酸化酶同工酶BB(GPBB)是一种心肌细胞中含量较高的酶。糖原磷酸化酶为糖原分解的关键酶，在心肌细胞肌浆网构成糖原分解复合物，该复合物对缺血引起的糖原分解特别敏感，使其构成发生改变，形成町溶性糖原磷酸化酶同工酶BB(GPBB)，透过细胞膜进入血液。

糖原磷酸化酶同工酶BB(GPBB)对心肌缺血缺氧敏感，在心肌损伤早期(小于4h)即可释放入血，是急性心肌损伤早期诊断的一项很好的指标。对急性心肌缺血的早期诊断优于心电图，是目前发现的急性心肌梗死(AMI)病人胸痛发作后4h内最敏感的指标。GPBB的这一特点在AMI的早期诊断方面弥补了cTnI的不足。随着生物化学、免疫、分子生物学及其检测技术的发展，发现GPBB对缺血性心肌损伤的早期诊断、产科、儿科学等方面的研究颇具价值。

常用的酶联免疫吸附试验(ELIsA)等检测方法耗时、需要特殊设备，不适于急诊室和现场对AMI的快速诊查的需要。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种糖原磷酸化酶同工酶BB近红外荧光法检测试剂盒及其用途，用于建立高效可行的糖原磷酸化酶同工酶BB近红外荧光检测技术，解决现有技术中的问题。本发明所提供的检测试剂盒结合近红外荧光检测技术，可快速，准确的检测出人全血/血清/血浆中糖原磷酸化酶同工酶BB。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明采用以下技术方案：

本发明的第一方面提供一种糖原磷酸化酶同工酶BB近红外荧光法检测试剂盒，包括位于背板上的试剂条，试剂条从加样端开始依次为样品垫、标记有免疫荧光探针的玻璃纤维素膜、包被有抗糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体的硝酸纤维素膜和吸水纸。

优选的，所述免疫荧光探针为抗糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体包被的近红外荧光乳胶微球颗粒。

优选的，硝酸纤维素膜上包被的抗糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体和所述近红外荧光乳胶微球颗粒上包被的抗糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体可以为相同的抗糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体，也可以为不同的抗糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体。

更优选的，所述硝酸纤维素膜上包被的抗糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体为Anti-GPBB抗体[17B6]，所述近红外荧光乳胶微球颗粒上包被的抗糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体为Anti-GPBB抗体[17B6]，或所述硝酸纤维素膜上包被的抗糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体为Anti-GPBB抗体[17B6]，所述近红外荧光乳胶微球颗粒上包被的抗糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体为Anti-GPBB抗体[1G6]。

更优选的，所述荧光乳胶微球颗粒的直径为140-160nm。

近红外光(NIR)，是介于可见光(VIS)和中红外光(MIR)之间的电磁波，ASTM定义NIR为波长在780nm-2526nm范围内的电磁波。在近红外光区，生物体自吸收或荧光强度很小，可避免背景干扰。同时由于散射光强度与波长的四次方呈反比，近红外区的散射干扰大为减少。

本发明的第二方面提供所述糖原磷酸化酶同工酶BB近红外荧光法检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：

1)用缓冲液将荧光乳胶微粒离心清洗并将乳胶颗粒分散，在清洗好的乳胶颗粒分散液中加入抗糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体；加入EDCA使抗体与颗粒偶联；再加入封闭液封闭乳胶颗粒上多余的基团，制备获得探针溶液；

2)将含有抗糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体的缓冲溶液喷加到硝酸纤维素膜上，烘干备用；

3)将步骤1)制备获得的探针溶液浸润玻璃纤维薄膜，干燥备用；

4)将步骤2)所得的硝酸纤维素膜、步骤3)所得的标记有免疫荧光探针的玻璃纤维素膜、样品垫、吸水纸及背板组装制备成糖原磷酸化酶同工酶BB近红外荧光检测试剂盒。

优选的，所述步骤1)中，再加入封闭液封闭乳胶颗粒上多余的基团，并加入冠醚，制备获得探针溶液，所述冠醚选自二环已基-18-冠-6、15-冠醚-5、18-冠醚-6中的一种或多种的组合。

更优选的，步骤1)制备获得的探针溶液中冠醚的浓度为0.1-20mg/ml，更优选为4-8mg/ml。

优选的，所述步骤1)中，缓冲液为磷酸盐(PBS)缓冲液。