[发明专利]一种检测牛传染性鼻气管炎病毒的引物、探针及试剂盒

权利要求书

1.一种用于通过RPA技术检测牛传染性鼻气管炎病毒的引物和探针组合，其特征在于，其正向引物序列如SEQ ID No.1所示，反向引物序列如SEQ ID No.2所示，探针序列如SEQ ID No.3所示。

2.权利要求1所述的引物和探针组合在制备检测牛传染性鼻气管炎病毒的检测试剂中的应用。

3.一种检测牛传染性鼻气管炎病毒的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包含权利要求1所述的引物和探针组合。

4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，试剂盒中还包括有：IBRV阳性对照模板、RPA扩增试剂、去离子水和侧流层析检测试剂。

5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述RPA扩增试剂包括：Rehydration缓冲液、大肠杆菌来源的recA重组酶、链置换DNA聚合酶、单链DNA结合蛋白和醋酸镁溶液。

6.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，侧流层析检测试剂包括侧流层析试纸条和杂交检测缓冲液。

7.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述醋酸镁溶液的浓度为280mM。

8.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述IBRV阳性对照模板的制备方法为：分别以序列如SEQ ID No.4和SEQ ID No.5所示的引物为上、下游引物，以IBRV的DNA为模板进行PCR扩增， PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳，回收目的片断后克隆至pEAST-T3载体，蓝白斑筛选重组质粒，测序，将测序结果进行比对，正确的重组质粒为IBRV阳性对照模板。

9.如权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，进行PCR的扩增的反应体系为50 μL：10×LA PCR Buffer II5μL、2.5 mM dNTP Mixture 8μL、LA Taq 0.5μL、模板2μL，10 μmol/L的上、下游引物各2μL，灭菌超纯水加至50μL；

PCR扩增的反应程序为94℃预变性3 min，然后进入94℃ 30s，55℃ 30s，72℃ 40s，共进行31个循环；72℃延伸10 min，最后停止于4℃。