[发明专利]一种针对高分子纳米材料的透射电镜简易检测方法

说明书

一种针对高分子纳米材料的生物透射电镜检测方法。首先通过纳米组装制备包载有含氟药物的高分子纳米胶束水溶液；然后采用简单、快速的电镜制样方法将胶束水溶液滴加在附有支持膜的铜网上，并对样品进行染色；最后采用生物透射电镜观察样品，得到清晰度高、对比度高的高分子胶束电镜图像。本发明在纳米材料检测技术的基础上引入了一种50nm以下高分子纳米材料的有效检测途径，将生物检测技术与纳米材料相结合，拓展了高分子纳米材料利用生物检测仪器的应用。与现有技术相比，本发明简化了纳米尺寸高分子材料电镜样品的制备过程，实现了利用透射电镜对50nm以下高分子胶束的快速、简易检测。

技术领域

本发明属于纳米技术领域，特别涉及一种针对高分子纳米胶束采用生物透射电镜的简易检测方法。

背景技术

对于高分子纳米胶束材料而言，透射电子显微镜观察是直观检测其形貌的重要手段。采用透射电镜观察胶束最早出现在1988年，研究者利用快速冷冻透射电子显微镜方法(cryo-TEM)，使用特制的样品台以避免样品溶液在制备过程中蒸发，采用液态乙烷作为传热介质使薄层样品快速凝固，在低温状态下观察到了胶束的存在，首次为胶束研究提供了直观的证据。

迄今为止，利用透射电镜观察胶束已经得到较为广泛的应用和发展，为能拍到清晰的胶束图像，在准备电镜样品时通常需要历经复杂的制备过程，如：纯化胶束后进行固定、脱水、包埋，而后可采用超薄切片、冷冻超薄切片、冷冻蚀刻等方法处理样品并观察；也有研究者将胶束溶液通过气流从毛细管中喷射出来雾化，用表面附有支持膜的铜网接住散落的胶束粒子；或者将有支持膜的铜网在胶束溶液中浸润后冷冻干燥再进行电镜观察。这些方法耗时长，工序多，样品制备过程复杂。

一般来说，透射电子显微镜按照加速电压分为高电压透射电子显微镜和低电压透射电子显微镜。

高压电镜通常指加速电压在200kV以上的透射电镜，电子束穿透力强，提高了分辨率，检测如金颗粒等高电子密度的纳米颗粒时易得到高质量图像，但主要由碳、氢、氧等轻元素组成的高分子散射电子能力较弱，如样品未按照常规固定、脱水、包埋的电镜制样方法，只经过快速简易处理即在高压电镜下观察，容易使样品损伤及反差减弱。120kV电子显微镜具有低加速电压，增强了电子束与样品的作用强度，能提升快速简易处理样品的图像衬度和对比度，同时电镜样品不易损伤及变形。

此外，目前较为清晰的胶束透射电镜图像胶束粒径多在50nm以上，在利用现有技术检测50nm以下的高分子胶束时仍然有很大的局限性。

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种针对高分子纳米材料尤其是胶束的简易、快速的生物透射电镜检测方法。本发明提供的方法以高分子纳米材料检测技术为基础，通过生物技术与高分子材料、化学的结合，能够显著提高50nm及以下尺寸的纳米材料电镜图像的质量，有利于进一步拓展生物透射电镜作为一种高分子纳米材料直接观测手段的应用。

本发明的检测方法中电镜样品制备简单，能够获得清晰及完美的图像，且所观察胶束的粒径可以在50nm以下，对于小尺寸高分子纳米颗粒的直观检测具有重要的推动作用，对高分子纳米材料在微观下的形态观察提供了新的技术手段，拓展了高分子纳米材料的研究领域。

为达上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种针对高分子纳米材料的检测方法，包括如下步骤：

1)以两亲性高分子材料和药物为原料，通过溶剂挥发法制备包载药物的高分子纳米胶束，得到胶束水溶液，用于下一步制样及检测；

2)将步骤1)得到的胶束水溶液稀释后取微量滴加于附有支持膜的铜网上，烘烤，如将放有铜网的表面皿置于烘片台上，使水分蒸发完全；对样品进行染色，然后用去离子水洗涤，洗涤完成后再次将样品完全烘干得到高分子纳米胶束；