[发明专利]一类双烷氧酰胺烷基阳离子肽脂质及其合成方法和应用

权利要求书

1.一类双烷氧酰胺烷基阳离子肽脂质，其化学结构式为：

其中：

x选自1～6；y选自1～8；R选自C_8-20烷基，该烷基包括直链烷基和支链烷基；AA选自精氨酸(Arg)、组氨酸(His)、天冬氨酸(Asp)、丙氨酸(Ala)、甘氨酸(Gly)、鸟氨酸(Orn)或赖氨酸(Lys)；B选自Orn或Lys。

2.权利要求1所述双烷氧酰胺烷基类阳离子脂质的合成方法，其特征是：步骤如下：

(1)以酰化试剂和醇类化合物进行酰化，所述酰化试剂为羰基二咪唑；所述醇类化合物为十二醇、十四醇、十六醇或十八醇；酰化试剂与醇类物质的摩尔比为1:10～10:1，反应溶剂为甲苯、二氯甲烷、DMF或氯仿，反应温度为10～60℃，反应时间为0.5～12h；

(2)酰化产物再与多胺类化合物反应，制备双长碳链中间体，所述多胺类化合物为二乙烯三胺、二丙烯三胺或二丁烯三胺等多胺，多胺与酰化产物摩尔比为1:2～1:8；催化剂为三乙胺、碳酸钠或甲基吡啶等，催化剂的加入量为多胺投料质量的10％，反应温度为10～100℃，反应时间为2～48h，经重结晶得到带有双长碳链的中间体N,N-双烷氧酰胺烷基胺，所述重结晶溶剂为乙酸乙酯或无水乙醇/水混合溶剂(v/v＝5:1)；

(3)采用保护试剂保护氨基酸的氨基，制备肽头部中间体：所述氨基酸为Lys、His、Arg、Asp、Ala、Gly或Orn；所述保护试剂为二碳酸二叔丁酯(Boc₂O)、芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺(Fmoc-OSu)或氯甲酸苄酯(CbzCl)；所述保护试剂与氨基酸摩尔比为1:8～8:1；反应溶剂为30～300mL水、乙腈或丙酮，反应温度为0～25℃，反应时间为0.5～2h，经重结晶得到肽头部中间体，所述重结晶溶剂为乙酸乙酯/石油醚混合溶剂(v/v＝3：1)；

(4)将步骤(3)制备的肽头部中间体，与步骤(2)制备的双长碳链中间体经过酰胺化进行连接：

a首先将肽头部中间体进行活化生成活泼酯，活化试剂为2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)、N,N'-二环己基碳酰亚胺(DCC)或HOBt，氨基酸与活化试剂摩尔比为1:1～1:8，反应溶剂为二氯甲烷、DMF或三氯甲烷，活化时间为0.5～2h，活化温度为0～30℃；

b在步骤a反应液中加入双长碳链中间体的二氯甲烷、DMF或三氯甲烷溶液，经过酰胺化使中间体的氨基与肽头部中间体的羧基生成酰胺键，两者摩尔比为1:8～8:1，催化剂为4-二甲氨基吡啶(DMAP)，1-羟基苯并三唑(HOBt)，催化剂加入量与双长碳链中间体摩尔比为1:1～1:8，反应时间为2h～120h，反应温度为20～60℃；

(5)脱掉氨基保护试剂。所述脱保护试剂为三氟乙酸或10％NaHCO₃，脱保护试剂与类脂化合物摩尔比为1:1～1:2，脱保护时间为0.5～12h，脱保护温度为0～4℃。经重结晶法进行提纯，重结晶溶剂为乙腈、无水乙醇、超纯水、乙酸乙酯或石油醚；

(6)重结晶后，产物溶解在氯仿中，使用硅胶柱纯化该粗产物，用甲醇/氯仿(3:1体积比)混合试剂进行洗脱。在70℃下，用旋转蒸发法去除溶剂，冻干，即得到含有一个氨基酸头部的双烷氧酰胺烷基阳离子肽脂质化合物；

(7)以含有一个氨基酸头部的双烷氧酰胺烷基阳离子肽脂质化合物为原料，合成其他双烷氧酰胺烷基类阳离子肽脂质：将步骤(3)制备的肽头部中间体与步骤(6)制备的含有一个氨基酸头部的阳离子肽脂质，进行氨基酸活化和酰胺化，得到头部为1～4个氨基酸的阳离子脂质化合物。两者摩尔比为1:8～8:1，具体反应条件与提纯方法与步骤(4)(5)(6)相同。

3.一种由权利要求1所述双烷氧酰胺烷基类阳离子肽脂质制备的阳离子脂质体，其特征是：该阳离子肽脂质体为双烷氧酰胺烷基类阳离子肽脂质分散在水相中形成的粒径大小为100nm左右的均一稳定的表面带有正电荷的脂质体。