[发明专利]一种用组织工程支架珠核培育珍珠的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种有核珍珠的培养方法，具体的说，涉及一种表面粘附有组织工程支架的珠核在有核珍珠培育中的应用。

背景技术

组织工程支架是人工合成的具有三维结构的框架，它模拟机体组织中细胞外基质的作用，使细胞能在这种三维结构上黏附、迁移、增殖，最终使组织得以重建。制备组织工程支架常用的材料有生物活性陶瓷、可降解高分子材料等。可降解的高分子材料可分为天然高分子材料和人工合成高分子材料。

目前有核珍珠的培养通常都是将外套膜细胞小片与珍珠核一起植入育珠蚌的插核部位，然后放入养殖场所中养殖。在珍珠蚌体内，从外套膜细胞小片游离出来表皮细胞与结缔组织细胞围绕珠核形成珍珠囊，分泌珍珠质形成珍珠。这种珠核由于育珠蚌的排斥导致吐核率高，同时由于细胞小片只能贴于珠核的一侧，使得外套膜细胞在珠核周围分布不均，导致培育的珍珠大小、色泽不均匀，圆形珍珠数量少，存在污株、尾巴珠、瑕疵珠等问题，优质珍珠生产率低。我国是珍珠养殖大国，珍珠产量占全世界95%，但价值只占8%不到，原因就是我国生产的高质量珍珠少，一、二、三等珠仅占20％左右，其中一等珠不足3％。

为解决这个问题，对比文献1“一种基于珍珠贝外套膜细胞培养生产珍珠的方法”（发明专利号：201310280635.7）公布了一种培养外套膜细胞后直接注入育珠蚌外套膜结缔组织部位培养珍珠的方法。但贝类生物的细胞体外大量和长期培养目前在技术上还存在很大困难（参考文献1，2），该技术描述的在体外培养细胞传代45代技术上难以实现。通常细胞会随着分裂次数的增加而逐渐衰老直至凋亡。贝类生物的体细胞在体外培养条件下一般生存期不会超过30天左右。对比文献2“游离细胞植入法培育有核珍珠” （发明专利号：：200510110378.8）公布了一种通过将外套膜细胞与珍珠核共培养，使得外套膜细胞粘附在珍珠核的表面，然后将粘附了外套膜细胞的珍珠核插入育珠蚌的插核部位来培养珍珠。此方法存在以下3方面问题：⑴能贴附于珠核表面生长的细胞只有表皮上皮细胞，但珍珠囊的形成也需要来自外套膜的结缔组织细胞（参考文献3）；⑵正常上皮细胞在人工培养的条件下只能贴壁生长成单层，细胞量过少。因此该发明通过在插核前后再另外滴入大量细胞液来解决细胞量不足和细胞种类单一的问题。⑶该方法还存在细胞无法贴附到珠核与培养皿的接触面，因此珠核表面存在无细胞区域的问题；此外球形珠核容易滚动，易于与其他珠核碰撞导致细胞损伤脱落（参考文献3）等问题。

本发明通过用酶消化将珍珠贝外套膜细胞分离成单个游离存在的状态，配制成细胞悬液，将其与外表面覆盖有一层厚度一致的可降解组织工程支架的珍珠核一同植入育珠蚌，游离外套膜细胞在珍珠贝体内会粘附到组织工程支架纤维上，由于正常细胞有沿贴附面呈单层生长的特点，因此会在珍珠核周围厚度一样的组织工程支架中形成比较均匀的分布。随着组织工程支架纤维在体内逐渐降解，外套膜细胞在珠核周围形成均匀的珍珠囊，分泌珍珠质，从而使得珠核周围新形成的珍珠层厚度一致。克服了细胞小片植入法存在的外套膜细胞在珠核周围分布不均，导致培育的珍珠形状、色泽不均匀的问题，达到生产优质珍珠的目的。

发明内容

本发明的目的是提供一种表面粘附有可降解组织工程支架的珠核在培育有核珍珠中的应用方法。通过在珍珠核的表面先覆盖一层可降解高分子聚合物作为组织工程支架，在珠核表面造成一个可以容纳细胞在其中生长的立体网络空间。并在组织工程支架中吸附有血清成分（含细胞生长所需的各种生长因子），使得贴附在珠核周围组织工程支架上的细胞得以快速分裂增殖。采用酶消化法将珍珠蚌外套膜细胞分离成单个游离存在的细胞悬液。使用时，先将珠核浸泡在细胞悬液中。用经过消毒处理的通道针在育珠蚌外套膜上开口，并制造通道，先向通道中滴加部分外套膜细胞悬液，然后将珠核移植到育珠蚌体内，再在通道中补加细胞悬液，用生物胶粘合创口以防细胞流出。

为了实现上述发明目的，本发明采用了以下技术方案：本发明所述的一种用组织工程支架珠核培育珍珠的方法，其特征是，在植入育珠蚌的珠核表面粘附有一层厚度均匀的可降解高分子聚合物作为组织工程支架，所述组织工程支架为一个可以容纳细胞生长的立体网络空间，将珍珠贝的外套膜组织用酶消化法分离成单个存在的游离的外套膜细胞，配制成一定细胞密度的外套膜细胞悬液，然后将珠核粘附外套膜细胞后与外套膜细胞悬液一起植入育珠蚌的插核位置来培育有核珍珠。

本发明所述的用组织工程支架珠核培育珍珠的方法，其包括以下步骤：

（1）珠核表面预处理：将珠核表面处理成适合组织工程支架材料粘附的状态；