[发明专利]H9N2亚型禽流感病毒NS1基因缺失减毒活疫苗候选株及其构建方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种通过反向遗传技术对H9N2亚型禽流感病毒(AIV)NS1蛋白长度进行修饰构建广谱性H9N2亚型AIV减毒活疫苗的方法，主要涉及的AIV为BJ-94-like和Y280-like谱系的毒株。

背景技术

H9N2亚型禽流感病毒呈世界性流行，自其于1994年在中国大陆鸡群首次分离后广为传播，逐渐在我国形成了地方性流行疾病，给我国的养殖业造成了巨大的经济损失。除感染家禽外，H9N2亚型AIV还能感染哺乳动物(猪和人等)。虽然H9N2亚型AIV感染人只是引起亚临床或者轻微的临床症状，但H9N2亚型AIV能够与其他亚型禽流感病毒重组从而产生新的致死人的流感病毒，如H5亚型禽流感病毒和H7N9亚型流感病毒。因此，H9N2亚型禽流感的防控在公共卫生上也具有重要意义。

疫苗免疫是防控禽流感的有效手段。然而由于AIV的基因组是分节段的RNA病毒易发生重配，RNA聚合酶复制的低保真性易导致病毒的快速变异，因此，现有灭活疫苗对禽流感防控效果并不理想。目前我国使用的全病毒灭活疫苗既有针对早期的毒株，如Ck/SH/F/98和Ck/SD/6/96(BJ/94谱系)(Li C,Yu K,Tian G,et al Evolution of H9N2influenza viruses from domestic poultry in Mainland China.Virology,2005,340:70-83)。也有针对近期的流行株(Y280谱系)(Zhang Y,Yin Y,Bi Y,et al.Molecular and antigenic characterization of H9N2avian influenza virus isolates from chicken flocks between 1998and 2007in China.Vet Microbiol 2012,156,285-293.)，免疫鸡群仍不时有H9N2亚型AI的疫情爆发。实验室条件下，SPF鸡群接种早期毒株制备的灭活疫苗后，使用当前流行的H9N2亚型AIV以滴鼻方式进行攻毒，仍会发生高水平的排毒(Sun Y,Pu J,Jiang Z,et al.Genotypic evolution and antigenic drift of H9N2influenza viruses in China from1994to 2008.Vet Microbiol,2010,146:215-225.)；而使用部分流行株制备的灭活疫苗也不能很好地保护SPF鸡只抵御H9N2病毒的攻击(刘东，宫晓，刘晓东，等.2013.H9N2亚型禽流感流行分析及疫苗毒株的筛选.中国动物检疫.2013.30.(6):45-50；万晓朋，曾显营，田国彬，等.H9N2亚型禽流感流行株灭活疫苗种毒的筛选.中国预防兽医学报.2010.32(4):277-280)。因此，研制针对不同谱系H9亚型AIV毒株具有交叉保护性的疫苗迫在眉睫。