[发明专利]一种水稻的育种方法

说明书

技术领域

本发明属于水稻育种技术领域，尤其涉及一种水稻的育种方法。

背景技术

现代水稻育种研究从理论和技术上已达到了很高的水平，但仍不能满足水稻生产发展的需求，尤其在抗病性、抗逆性、高光效、品质及产量等重要农艺性状的改良上成效不令人十分满意。这是因为水稻基因组本身有用的基因资源已利用殆尽。由于农作物育种目标的迫切性和现有育种手段和材料的局限性，迫使水稻育种专家去寻找更有效的育种新材料和新途径。

通过远缘杂交方法将外源基因转移到水稻，由于种间杂交的不亲和性，杂交后代疯狂分离，很难得到稳定的后代。

花粉管通道法由我国周光宇先生70年代提出，在水稻、棉花、玉米、大豆、瓜类等大多农作物上得到广泛应用。但主要采用整体DNA导入。

野生菰是水稻的近缘属植物。菰中蕴含丰富的有利基因，具有明显的比较优势：①株型良好，光合效率较理想；分蘖能力很强，生长速度快，生物产量高。②抗逆性强，野生菰的耐冷性强，耐旱耐涝，抗病性强.③灌浆成熟极快，授粉后15天左右灌浆成熟完毕，随即进入后熟。④营养价值高。将野生菰的基因导入水稻中，选择具有水稻和菰优良性状和保健作用的新品种。开展高产、优质、抗性强的巨穗型水稻新品种的产业化示范推广，将有助于提高水稻单产,提高水稻的营养价值,增加水稻抗性，对于我国水稻绿色产业的发展和保障国家粮食安全具有重要的战略意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种水稻的育种方法，本发明通过限制性内切酶酶切野生菰DNA导入水稻后，后代的变异率比完整DNA导入明显提高，稳定速度快，获得了优良的水稻新株系和新品种。

本发明提供了一种水稻的育种方法，包括以下步骤：

a)采用CTAB法提取野生菰DNA；

b)用限制性内切酶酶切步骤a)获得的野生菰DNA，获得酶切野生菰DNA；

c)采用花粉管通道法将步骤b)获得的酶切野生菰DNA导入水稻，选择变异材料进行育种。

优选的，所述限制性内切酶为HindⅢ.和EcoRⅠ。

优选的，所述步骤a)具体为：

a1)取野生菰幼叶，用液氮研磨，加入2倍CTAB提取缓冲液混匀后，加入1倍CTAB缓冲液，55-65℃恒浴30min；

a2)向步骤a1)获得的溶液中加入体积比为24:1的氯仿和异戊醇，混合后离心；

a3)向步骤a2)获得的上清液中加入CTAB缓冲液、体积比为24:1的氯仿和异戊醇，混合后离心；

a4)向步骤a3)获得的上清液中加入异丙醇，离心，得到的沉淀用高盐缓冲液溶解后离心；

a5)向步骤a4)获得的上清液中加入异丙醇，离心，得到的沉淀用双蒸水溶解，加入2.5倍体积95％冷乙醇-40℃冰箱中沉淀2h后离心；

a6)将步骤a5)获得的沉淀用冷乙醇洗一次，自然干燥后，用TE缓冲液溶解，加入RNA酶贮存缓冲液处理后，获得野生菰DNA。

具体而言，所述步骤a)包括以下步骤：

a1)取50克野生菰幼叶，用液氮研磨，加入50ml 2倍CTAB提取缓冲液的500ml离心管中充分混匀后，再加入50ml 1倍CTAB缓冲液，在55-65℃恒浴30min

a2)向步骤a1)获得的溶液中加入150ml氯仿:异戊醇(24:1)，充分摇动5min，8000r/min，室温下离心5min。

a3)向步骤a2)获得的上清液中加入1/10体积的10％的CTAB缓冲液，加入200ml氯仿:异戊醇(24:1)，充分摇动5min，4000r/min，室温下5min离心。

a4)向步骤a3)获得的上清液中加入0.6倍体积的异丙醇，室温下30min，5000转，4℃离心5min。得到沉淀用0.8ml高盐缓冲液充分溶解，15000r/min离心2min。

a5)向步骤a4)获得的上清液中加入0.6倍体积的异丙醇，室温下30min，5000转，4℃离心5min。得到的沉淀用4ml双蒸水溶解，加入2.5倍体积95％的冷乙醇，-20℃冰箱中2h以上，15000转离心20min。

a6)步骤a5)获得的沉淀用70％的冷乙醇洗一次，自然干燥后，用2000μl 0.1倍TE缓冲液溶解，加入200μl RNA酶贮存缓冲液(1mg/ml)，37℃，一小时降解RNA，获得野生菰DNA。

a7)紫外吸收光谱法检测DNA的浓度和纯度：