[发明专利]一种利用HRM法进行牛/羊肉鉴别的标记引物和方法

权利要求书

1.一种牛肉鉴别标记，其特征在于：标记为3个，分别为：

牛肉基因标记1，序列如SEQ ID NO.1所示；

牛肉基因标记2，序列如SEQ ID NO.2所示；

牛肉基因标记3，序列如SEQ ID NO.3所示。

2.一种利用HRM法进行牛肉鉴别的标记引物，其特征在于： 根据牛肉基因标记1，设计标记引物对1；其中，

牛肉标记引物1F：GTTTGACCTGCTCCTAACTCCATCCC，

牛肉标记引物1R：GGAGGCAGTCGTCAGGCTATTCAA；

根据牛肉基因标记2，设计标记引物对2；其中，

牛肉标记引物2F：GCAGTGAGATGACCCCGTGGA，

牛肉标记引物2R：GCCATAAGGGAGGAACACTCTGAC；

根据牛肉基因标记3，设计标记引物对3；其中，

牛肉标记引物3F：ACAGTGGGAACATTTCAAAGGAGGC，

牛肉标记引物3R：GGTGTCAGAGGACCTGTCAGTGGAGT。

3.一种羊肉鉴别标记，其特征在于：标记为3个，分别为：

羊肉基因标记1，序列如SEQ ID NO.4所示；

羊肉基因标记2，序列如SEQ ID NO.5所示；

羊肉基因标记3，序列如SEQ ID NO.6所示。

4.一种利用HRM法进行羊肉鉴别的标记引物，其特征在于：根据羊肉基因标记1，设计标记引物1；其中，

羊肉标记引物1F：GGTGCTGAATGAGAAATG，

羊肉标记引物1R：CTAAATGGGTCAGAAACC；

根据羊肉基因标记2，设计标记引物2；其中，

羊肉标记引物2F：CGATTCAGATGCCAAGAG，

羊肉标记引物2R：TGAGAAGGGATACAAGCA；

根据羊肉基因标记3，设计标记引物3；其中，

羊肉标记引物3F：CTTTGCCACATTCATTAC，

羊肉标记引物3R：TCAGTGTACGCTCAACTC。

5.一种利用HRM法进行牛肉鉴别的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

1）选取特异存在于牛基因中的位点，并根据选取位点，设计相应引物；

2）取牛肉、猪肉、鸡肉、鸭肉、鹅肉品种，每个品种7个样品，每份样品150mg-250mg，分别提取DNA；

3）利用HRM法对每个样品进行检测：样品DNA在实时荧光PCR仪中进行PCR扩增过程，扩增结束后，在此仪器中测试每个样品的熔解温度，仪器通过收集到的荧光信号绘制相应的熔解曲线；

4) 分析不同品种检测得到的溶解曲线图，可以发现牛肉标记引物1、2、3用于牛肉检测时可以形成单一的明显熔解峰，而在用于猪肉、鸡肉、鸭肉、鹅肉检测时，均无单一的熔解峰，因此可以确定通过牛肉标记引物1、2、3可以特异性地检测出牛肉存在；

5）后期，提取待检测肉样品的DNA，用HRM法对DNA样品进行检测后，与真牛肉的检测结果进行比对，验证所分析的待检测肉样品是牛肉；

所述牛基因中的位点为：

牛肉基因标记1，序列如SEQ ID NO.1所示；

牛肉基因标记2，序列如SEQ ID NO.2所示；

牛肉基因标记3，序列如SEQ ID NO.3所示；

所述引物为：

标记引物对1；其中，

牛肉标记引物1F：GTTTGACCTGCTCCTAACTCCATCCC，

牛肉标记引物1R：GGAGGCAGTCGTCAGGCTATTCAA；

标记引物对2；其中，

牛肉标记引物2F：GCAGTGAGATGACCCCGTGGA，

牛肉标记引物2R：GCCATAAGGGAGGAACACTCTGAC；

标记引物对3；其中，

牛肉标记引物3F：ACAGTGGGAACATTTCAAAGGAGGC，

牛肉标记引物3R：GGTGTCAGAGGACCTGTCAGTGGAGT。