[发明专利]一种利用HRM法进行牛/羊肉鉴别的标记引物和方法

说明书

本发明属于食品技术领域，提供一种利用HRM法进行牛肉、羊肉鉴别的标记引物以方法。牛肉鉴别的标记，分别为：牛肉基因标记1，序列如SEQ ID NO.1所示；牛肉基因标记2，序列如SEQ ID NO.2所示；牛肉基因标记3，序列如SEQ ID NO.3所示。羊肉鉴别标记，分别为：羊肉基因标记1，序列如SEQ ID NO.4所示；羊肉基因标记2，序列如SEQ ID NO.5所示；羊肉基因标记3，序列如SEQ ID NO.6所示。本发明通过HRM法鉴别牛、羊肉，具有快速、简便的特点，整个过程仅需2个小时完成。

技术领域

本发明属于食品技术领域，涉及利用HRM法进行牛肉、羊肉鉴别的标记引物以方法。

背景技术

食品中肉类掺杂掺假已经发展成我国食品质量安全控制面临的重要挑战之一。在我国，由于羊肉、牛肉价格较高，而猪肉、鸡肉等相对廉价，这使得很多不法商家为谋取暴利，使用相对廉价的肉类原料冒充牛/羊肉制品进行销售。目前，传统的以经验与感官为主的鉴别方法已远远无法满足对食品中肉制品掺假现象进行监管与控制的需要，建立科学、准确的羊肉、牛肉鉴别方法非常必要。

肉品的物种鉴别方法主要有蛋白质水平的检测方法和核酸水平的检测方法，与蛋白质水平的检测相比，核酸检测具有灵敏、特异、快速等优点，已逐渐成为肉品成分鉴别的发展趋势。

目前，在国内外相关的研究中，对于肉品成分的鉴别，主要采用DNA探针杂交、RFLP-PCR法(限制性片段长度多态性扩增)、RAPD-PCR法(随机扩增多态性PCR)等方法。但DNA探针杂交法存在对交叉感染灵敏度差，灵敏度低的缺点，RFLP-PCR法操作复杂，且易受到目标基因序列中酶切位点随机突变的影响，产生检测结果的不确定性，RAPD-PCR法灵敏度低，实验重复性差，这成为了基于核酸水平进行肉品物种鉴别的一个障碍。因此，若能找到一种简单、快捷、准确的检测方法，将有助于牛、羊肉鉴别技术的大规模推广应用。

发明内容

为了克服目前牛/羊肉检测过程复杂、效率低下等问题，提供一种利用HRM法进行牛/羊肉鉴别的标记引物和方法。

本发明的目的通过以下技术方案实现

1.本发明提供一种牛肉鉴别的标记，，标记为3个，分别为：

牛肉基因标记1，序列如SEQ ID NO.1所示；

牛肉基因标记2，序列如SEQ ID NO.2所示；

牛肉基因标记3，序列如SEQ ID NO.3所示。

2.本发明还提供一种利用HRM法进行牛肉鉴别的标记引物，其中，根据牛肉基因标记1，设计标记引物对1；其中，

牛肉标记引物1F：GTTTGACCTGCTCCTAACTCCATCCC，

牛肉标记引物1R：GGAGGCAGTCGTCAGGCTATTCAA；

根据牛肉基因标记2，设计标记引物对2；其中，

牛肉标记引物2F：GCAGTGAGATGACCCCGTGGA，

牛肉标记引物2R：GCCATAAGGGAGGAACACTCTGAC；

根据牛肉基因标记3，设计标记引物对3；其中，

牛肉标记引物3F：ACAGTGGGAACATTTCAAAGGAGGC，

牛肉标记引物3R：GGTGTCAGAGGACCTGTCAGTGGAGT。

3.本发明还提供一种羊肉鉴别标记，标记为3个，分别为：

羊肉基因标记1，序列如SEQ ID NO.4所示；

羊肉基因标记2，序列如SEQ ID NO.5所示；