[发明专利]一种基于携带His标签重组抗原的发光免疫检测方法

权利要求书

1.一种基于携带His标签重组抗原的发光免疫检测方法，其特征在于：包括如下步骤，

1)获得His-重组蛋白；

2)将待检血清、His-重组蛋白溶液、His抗体包被的发光微球溶液充分混匀，并于37℃温浴30～45min；

3)温浴后，经高速离心10～15分钟，弃上清；

4)加入生物素标记的第二抗体溶液和链霉亲和素包被的感光微球溶液，充分混匀，37℃温浴15～30min；

5)用光激发发光检测仪在615nm下检测光信号。

2.根据权利要求1所述的基于携带His标签重组抗原的发光免疫检测方法，其特征在于：所述步骤1)中，His-重组蛋白通过以下步骤获得，根据抗原一级结构合成目的DNA，并经分子生物学技术将目的基因与携带His标签的表达质粒重组，转染合适宿主进行目的蛋白的表达，再经镍亲和层析柱初步纯化获得His-重组蛋白，此物质作为已知抗原用于未知检测抗体。

3.根据权利要求1所述的基于携带His标签重组抗原的发光免疫检测方法，其特征在于：所述步骤2)中，三种物质混合均匀后，在37℃下温浴30～45min。

4.根据权利要求1或3所述的所述的基于携带His标签重组抗原的发光免疫检测方法，其特征在于：所述步骤2)中，待检血清、His-重组蛋白溶液、His抗体包被的发光微球溶液的体积比为1:1:1；且待检血清是用Tirs-HCl溶液按照体积比为1:10～20进行稀释处理的，优选的，1:10。

5.根据权利要求1所述的基于携带His标签重组抗原的发光免疫检测方法，其特征在于：所述步骤3)中，高速离心速度为10×10³r/min，且高速离心的时间为10min。

6.根据权利要求1所述的基于携带His标签重组抗原的发光免疫检测方法，其特征在于：所述步骤4)中，生物素标记的第二抗体溶液、链霉亲和素包被的感光微球溶液与待检血清的体积比为2：4：1。

7.根据权利要求1或6所述的基于携带His标签重组抗原的发光免疫检测方法，其特征在于：所述步骤4)中，所述生物素标记的第二抗体为兔抗人IgE或兔抗人IgG中的一种。

8.根据权利要求1～7任一项所述的基于携带His标签重组抗原的发光免疫检测方法在特异性IgE或自身抗体IgG检测中的应用。

9.根据权利要求1～7任一项所述的基于携带His标签重组抗原的发光免疫检测方法在病原体IgG或IgM检测中的应用。

10.一种用于如权利要求1～7任一项所述的基于携带His标签重组抗原的发光免疫检测方法的试剂盒，其特征在于，包括生物素标记的第二抗体、链霉亲和素包被的感光微球、生物素标记第二抗体、携带His标签的重组蛋白。