[发明专利]一种单磷酸阿糖腺苷的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及抗病毒药物的制备技术领域，尤其涉及一种单磷酸阿糖腺苷的制备方法。

背景技术

单磷酸阿糖腺苷(vidarabine monophosphate，Am-AMP) 是β-D-阿糖腺苷(Ara-A) 的单磷酸化合物，是一种人工合成的腺嘌呤核苷类抗病毒药。目前在我国主要用于慢性病毒性肝炎、单纯疱疹病毒、带状疱疹病毒、牛痘病毒以及多种动物疱疹病毒和少数致癌RNA 病毒等。单磷酸阿糖腺苷已在欧洲、美国、日本等许多国家上市。由于单磷酸阿糖腺苷临床用药剂量很大，为满足临床用药需要，适合工业化生产的单磷酸阿糖腺苷的合成工艺开发非常必要。现有的单磷酸阿糖腺苷的制备方法主要有化学法、生物转化法以及基因工程法，化学法因研究开发技术比较成熟，目前市场上的单磷酸阿糖腺苷普遍采用化学法制备。

中国专利公布号CN103204890A公开了一种磷酸化制备单磷酸阿糖腺苷的方法，具体的说，以阿糖腺苷为起始原料，经惰性气体保护在缚酸剂和催化剂的作用下经磷酸化后，通过活性炭脱色等后处理即得粗品单磷酸阿糖腺苷，此工艺路线简单，成本低，收率高，相对于现有技术，生产过程毒性大大降低，适合工艺化生产。但是该方法使用惰性气体保护，在缚酸剂和催化剂的作用下反应，反应后产生大量含有有机溶剂和三氯氧磷的废液，三氯氧磷遇水蒸气分解成磷酸与氯化氢，含磷可致磷中毒，对皮肤、粘膜有刺激腐蚀作用，毒性与光气类似。短期内吸入大量蒸气，可引起上呼吸道刺激症状、咽喉炎、支气管炎；严重者可发生喉头水肿窒息、肺炎、肺水肿、紫绀、心力衰竭。亦可发生贫血、肝脏损害、蛋白尿，与眼和皮肤接触引起灼伤。长期低浓度接触可引起口、眼及呼吸道刺激症状，对环境污染较大。

中国专利公布号CN 104372050 A公开了一种单磷酸阿糖腺苷的方法，通过先制备共表达嘌呤核苷磷酸化酶和尿苷磷酸化酶的基因工程菌，再利用该基因工程菌制备单磷酸阿糖腺苷的方法。于通过分子克隆的方法在基因工程菌中共同表达嘌呤核苷磷酸化酶和尿苷磷酸化酶，获得具有高酶比活的阿糖腺苷生物转化菌，应用本发明得到的菌体生产阿糖腺苷，将得到的阿糖腺苷经惰性气体保护在缚酸剂、催化剂的作用下经磷酸化后，处理即得单磷酸阿糖腺苷。最终还是将得到的阿糖腺苷经惰性气体保护在缚酸剂、催化剂的作用下经磷酸化后，处理即得单磷酸阿糖腺苷，该方法与中国专利公布号CN103204890A一样存在着相同的问题。

因此，亟需提供一种构思不同的单磷酸阿糖腺苷的制备方法，以解决上述问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种单磷酸阿糖腺苷的制备方法，解决了现有技术中制备单磷酸阿糖腺苷的过程对环境污染较大的技术问题。

本发明采用的技术手段如下：一种单磷酸阿糖腺苷的制备方法，以β-D-阿糖腺苷为起始原料，加入反应酶进行酶促合成反应，经析晶、过滤后既得所述单磷酸阿糖腺苷。

具体地，包括如下步骤：

1）配制反应液：在温度为25℃~45℃的条件下，将ATP.Na₂、β-D-阿糖腺苷、甘油、镁离子溶液搅拌得混合液，所述ATP.Na₂、β-D-阿糖腺苷、镁离子溶液的摩尔质量比为1：1~5：10~15：0.05~0.2，在混合液中调节PH值至7.5~9.0，加入二硫苏糖醇既得所述反应液。

2）酶促合成反应：在所述反应液中加入浓度为10^-5~10^-3mmol/L反应酶进行酶促合成反应，加入碱性溶液控制反应液的PH值为7.6~8.6，反应时间为24h~72h，完成酶促合成反应。

3）过滤析晶：将步骤2）中完成酶促合成反应的反应液冷却至15℃~24℃，过滤得滤液，将所述滤液冷却至-2℃~14℃析晶，再过滤，干燥，既得所述单磷酸阿糖腺苷。

其化学反应式如下：

优选地，在步骤2）中，反应液的pH值不再变化时取样做HPLC分析，当β-D-阿糖腺苷含量小于3%时，完成酶促合成反应。

优选地，在步骤1）中，所述镁离子溶液为醋酸镁、硫酸镁、氯化镁的一种。

优选地，在步骤2）中，所述合成酶为肌酸激酶、磷酸激酶、腺苷激酶的一种。

优选地，在步骤2）中，在反应时间为24h后，每间隔6h~10h取样做HPLC分析，当β-D-阿糖腺苷含量小于3%时，完成酶促合成反应。

优选地，在步骤3）中，所述过滤为通过粗蛋白膜过滤。