[发明专利]一种合成利西拉来的方法

权利要求书

1.一种合成利西拉来的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、合成在SEQ ID NO:1所示氨基酸序列N端、His侧链上偶联有保护基的多肽片段1；

合成在SEQ ID NO:2所示氨基酸序列N端、Glu侧链上偶联有保护基的多肽片段2；

合成在SEQ ID NO:3所示氨基酸序列N端偶联有保护基的多肽片段3；

合成在SEQ ID NO:4所示氨基酸序列N端、Ser侧链上偶联有保护基的多肽片段4；

合成在SEQ ID NO:5所示氨基酸序列N端偶联有保护基的多肽片段5；

步骤2、将N端、Lys侧链上偶联有保护基的保护Lys，在缩合试剂和活化试剂作用下和氨基树脂偶联，形成肽树脂1，从肽树脂1的N端出发，按照SEQ ID NO:6所示氨基酸序列C端到N端的顺序，在缩合试剂和活化试剂作用下，逐一偶联保护氨基酸，形成肽树脂2，所述氨基树脂为Fmoc-Rink Linker-氨基树脂；

步骤3、在缩合试剂和活化试剂作用下，将多肽片段5的C端和肽树脂2的N端偶联形成肽树脂3，然后将多肽片段4的C端和肽树脂3的N端偶联形成肽树脂4；

步骤4、在缩合试剂和活化试剂作用下，将N端偶联有保护基的保护Pro的C端和肽树脂4的N端偶联形成肽树脂5，然后将多肽片段3的C端和肽树脂5的N端偶联形成肽树脂6；

步骤5、在缩合试剂和活化试剂作用下，从肽树脂6的N端出发，按照SEQ ID NO:7所示氨基酸序列C端到N端的顺序，逐一偶联保护氨基酸，形成肽树脂7；

步骤6、在缩合试剂和活化试剂作用下，将多肽片段2的C端和肽树脂7的N端偶联形成肽树脂8，然后多肽片段1的C端和肽树脂8的N端偶联形成利西拉来树脂；

步骤7、利西拉来树脂酸解脱除C端树脂和所有保护基得到利西拉来粗品，粗品纯化转醋酸盐，获得利西拉来成品，所述酸解采用由体积百分比为80-95％的TFA、体积百分比为1-10％的EDT、余量为水组成的混合酸解液酸解。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述多肽片段1-多肽片段5均通过固相合成法或液相合成法合成。

3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述多肽片段1为Fmoc/Boc-His(Trt)-Gly-OH，多肽片段2为Fmoc-Glu(OtBu)-Gly-OH，多肽片段4为Fmoc-Ser(tBu)-Ser(tBu)-OH，多肽片段5为Fmoc-Gly-Ala-OH，多肽片段3为Fmoc-Gly-Gly-OH。

4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤2所述保护氨基酸为Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Pro-OH。

5.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤5所述保护氨基酸为Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH。

6.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述缩合试剂为N,N-二异丙基碳二亚胺、N,N-二环己基碳二亚胺，六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷/有机碱、2-(7-氮杂-1H-苯并三氮唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯/有机碱、苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐/有机碱、O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸酯/有机碱中的一种。

7.根据权利要求6所述方法，其特征在于，所述有机碱为N,N-二异丙基乙胺、三乙胺或N-甲基吗啡啉。

8.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述活化试剂为1-羟基苯并三唑或N-羟基-7-氮杂苯并三氮唑。

9.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述粗品纯化转醋酸盐具体为：

利西拉来粗品用醋酸溶解后采用高效液相色谱法进行纯化，获得利西拉来纯化中间体浓缩液，然后以流动相系统为1％醋酸/水溶液-乙腈，以高效液相色谱法进行转醋酸盐。