[发明专利]一种基于超声破碎的食用菌液体菌种制作方法

权利要求书

1.一种基于超声破碎的食用菌液体菌种制作方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）活化保藏菌种： 保藏的食用菌母种接种至新鲜斜面，25-27℃培养活化7-10 d；

（2）活化菌种转至马铃薯葡萄糖琼脂平板培养基（PDA）培养， 25-27℃培养5-10 d；

（3）待长出菌落后用打孔器于菌落近边缘打孔：无菌条件下，用直径0.5-1 cm 的打孔器于平板中菌落近边缘打孔；

（4）挑取打孔后琼脂块菌种至装有液体培养基的摇瓶培养：挑取打孔琼脂块菌种至50 mL 液体培养基摇瓶培养，30℃、160 rev/min 培养5-10 d；

（5）利用超声波细胞破碎仪对培养后的菌种进行破碎，得到菌丝体均质化的液体菌种，从而数量级扩增接种物生长点，作为液体深层发酵或制备原种、栽培种、代料栽培的接种物；

利用超声波细胞破碎仪对培养后的菌种直接进行破碎，每次超声10 s、超声6 次，或每次超声20 s、超声3次，共1 min，超声功率250 W，得到含大量菌丝片段的均质化液体菌种；

液体菌种接种至装有液体培养基的摇瓶，接种量为2% (v/v)，温度30℃、160 rev/min培养3-7 d；

收集菌丝体和发酵液，用于活性物质提取；或者再次超声破碎，得到的菌种用于扩大液体发酵或作为大量制备原种、栽培种或代料栽培的接种物。

2.如权利要求1 所述的基于超声破碎的食用菌液体菌种制作方法，其特征在于：所述步骤（5）的均质化液体菌种，可以继续扩大培养后再次进行超声破碎，得到更大量的菌种。

3.如权利要求1 所述的基于超声破碎的食用菌液体菌种制作方法，其特征在于：所述步骤（4）的液体培养基配方为：葡萄糖35 g，蛋白胨3.5 g，KH₂PO₄ 1 g，MgSO₄ 0.5g，维生素B1 0.01 g，1000 mL 去离子水。