[发明专利]一种基于超声破碎的食用菌液体菌种制作方法

说明书

技术领域

本发明属于食用菌培养技术领域，具体涉及一种基于超声破碎的食用菌液体菌种制作方法。

背景技术

食用菌是一类富有营养与药用价值的大型真菌，它主要利用农业、林业以及工业生产中所产生的下脚料如稻草、玉米芯、棉子壳、木屑等可再生废弃物作为原料进行生产，转废为宝，生产的各种菇类可供人类食用和药用。由于这些原材料均属可再生资源，因此食用菌产业具有可持续发展的特点，与此同时这些废弃物的利用还可减少其对环境的破坏作用，可以说食用菌是地球生态循环的关键组成部分。目前，食用菌生产在我国正快速发展，已成为我国农业生产的重要组成部分，我国也因此成为世界最重要的食用菌生产国。

目前食用菌生产主要采用代料栽培模式，通常采用代料基质培养的固体菌种作为接种物，但固体菌种具有生产周期长、菌龄不一致、接种劳动强度大以及不利于机械化接种等缺点。与固体菌种相比，液体菌种具有生产周期短、生产自动化水平高、菌龄均一、萌发吃料快等优点，因此，食用菌液体菌种用于食用菌栽培的前景十分看好，是今后发展的必然趋势，近年来液体菌种开始应用于少数菇类的生产正是这一趋势的体现，取得了显著的效益。此外，食用菌液体深层发酵开始应用于多糖、酶等活性产物生产，有可能成为食用菌生产新方法，其过程也离不开液体菌种的制备。

食用菌液体菌种制备通常先将菌种活化，再转至平板培养，待菌落长好后用打孔器于培养菌落近边缘打孔，挑取琼脂块进行液体培养，作为液体菌种，或以此作为菌种培养二级种，以扩大菌种量，视菌种需要量可进一步摇瓶或发酵罐扩大培养。由于食用菌液体培养时主要以菌丝球形式生长，直接将液体菌种作为接种种子时生长点极少，致使生长速度慢或需要加大接种量，此外，原始液体菌种接种时难于准确控制接种量，以及由于菌丝球过大不利于机械化接种的实现。为提高液体菌种生长点、便于接种以及准确控制接种量，少数人采用研磨或机械均质法将原始液体菌种均质处理后再用于接种，但这两种方法均易导致菌种污染，且均质程度不够高，因此，开发更有效的食用菌液体菌种均质方法具有十分重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种利用超声波破碎技术获得食用菌液体菌种的方法，以提高液体菌种的使用效率和便于自动化接种。

为了实现以上目的，本发明的技术方案如下：

本发明一种基于超声破碎的食用菌液体菌种制作方法，包括以下步骤：

（1）活化保藏菌种；

（2）活化菌种转至马铃薯葡萄糖琼脂平板培养基（PDA）培养；

（3）待长出菌落后用打孔器于菌落近边缘打孔；

（4）挑取打孔后琼脂块菌种至装有液体培养基的摇瓶培养；

（5）培养后利用超声波细胞破碎仪破碎，得到含大量菌丝片段的均质化液体菌种，数量级扩增接种物的生长点，作为液体深层发酵或制作原种和栽培种的接种物以及代料栽培的接种物。

其中，所述步骤（5）的均质化液体菌种，可以继续扩大培养后再次进行超声波破碎，得到更大量的菌种。

具体如下：

（1）保藏的食用菌母种接种至新鲜斜面，25-27℃培养活化7-10 d；

（2）活化菌种接种至PDA平板，25-27℃培养5-10 d；

（3）无菌条件下，用直径0.5-1 cm的打孔器于平板中菌落近边缘打孔；

（4）挑取打孔琼脂块菌种至50 mL液体培养基中进行摇瓶培养，30℃、160 rev/min培养5-10 d；液体培养基配方为：葡萄糖35 g，蛋白胨 3.5 g，KH₂PO₄ 1 g，MgSO₄ 0.5g，维生素B₁ 0.01 g，1000 mL去离子水；

（5） 培养后进行超声波破碎，超声探头消毒后直接置于摇瓶液体培养物中，超声破碎条件为：连续间断超声6次、每次10 s，或超声3次、每次20 s，共1 min，功率为250 W，得到含大量菌丝片段的均质化液体菌种；

（6）液体菌种接种至装有液体培养基的摇瓶，接种量为2% (v/v)，温度30℃，160 rev/min培养3-7 d。培养时间视菌种和培养目的而定，如作为液体菌种，则培养时间宜短，这时菌种活性高；如以收集菌丝体及活性产物为目的，则培养时间可较长，以充分发酵。