[发明专利]一种测定Dickkopf-1与细胞凋亡在激素性股骨头缺血性坏死中作用的方法

说明书

本发明公开了一种测定Dickkopf‑1与细胞凋亡在激素性股骨头缺血性坏死中作用的研究方法，通过收集经全髋置换术取下的SANFH的股骨头标本作为实验组，股骨颈骨折髋关节置换术后标本作为对照组，切取股骨头标本经固定、脱钙，制作切片，电镜观察骨细胞形态变化，光镜观察其病理变化，并用HE染色计数空缺骨陷窝，免疫组织化学染色法检测Dickkopf‑1的表达，用TUNEL凋亡检测试剂盒检测骨细胞凋亡，探索Dickkopf‑1与细胞凋亡在SANFH中的作用。本发明能为该病早期诊断、治疗提供一定帮助，也可为今后SANFH的临床预防及治疗提供理论依据。

技术领域

本发明属于医学研究领域，尤其涉及一种Dickkopf-1与细胞凋亡在激素性股骨头缺血性坏死中作用的研究方法。

背景技术

激素性股骨头缺血坏死(Steroid-induced Avascular Necrosis of FemoralHead，SANFH)是指因长期使用或短期大量使用肾上腺皮质激素(以下简称激素)后造成股骨头活性成分的死亡所引起的病理过程。早在20世纪50年代就已发现，大量使用激素可以导致股骨头坏死。目前由于临床上对糖皮质激素的广泛应用，致使SANFH的临床病例数大幅度增加。SANFH为非创伤性股骨头坏死中发病率最高的一种类型。SANFH主要累及中青年人群，多为双侧性，其坏死率和致残率远高于一般的特发性股骨头缺血坏死。2003 年“非典”以后，又涌现出大量SANFH病例。激素引起的SANFH是一个非常复杂的生物学过程，具体的发病机制仍然不是很清楚，因此，探明SANFH的发病机制，仍然是该领域的研究重点。

虽然自上个世纪60年代开始，许多学者就开始致力于对SANFH发病机制的研究，但到目前为止仍未得到确切结论，现存在诸多比较分散的学说，比较具有代表性的有脂肪代谢紊乱、血管内凝血、激素的细胞毒作用、骨内压增高等。但是，其确切病理生理学机制并未明确。近年，相关基因学研究表明，SANFH与细胞凋亡、血液系统相关基因以及遗传易感性等因素有关。随着分子生物学的发展，细胞凋亡理论已成为研究器官组织损伤和衰老发生机制的重要研究方向，受到众多国内外学者的重视。细胞凋亡是由基因控制的细胞主动死亡，是多种细胞有机体为维护内环境稳定、调控机体发育进行的程序化细胞死亡，为细胞衰老自然死亡的主要方式之一。虽然细胞凋亡是一种生理过程，但或多或少都会引起疾病发生。细胞凋亡的发生主要与氧化应激、线粒体损伤及钙稳态失衡等有关；凋亡信号转导通路受基因调控及许多诱导因素(如激素和生长因子的失衡等)的影响。近年来已有许多学者开始初步探讨骨细胞和成骨细胞的凋亡在SANFH中的作用，对其发病机制有了新的认识。但遗憾的是，这些研究还尚未深入到对骨细胞、成骨细胞凋亡机制的研究中。而亦有研究表明在其他疾病里如肝癌、胃癌等Wnt信号途径与细胞凋亡有密切关系，但在骨细胞内尚未研究方法，而且有大量研究表明激素虽对Wnt受体LRP表达的影响甚微，但可显著增加Wnt拮抗分子Dickkopf-1的表达。

发明内容

本发明的目的在于提供一种Dickkopf-1与细胞凋亡在激素性股骨头缺血性坏死中作用的研究方法，旨在探索Dickkopf-1与细胞凋亡在激素性股骨头缺血性坏死中的作用，为进一步探讨激素性股骨头缺血性坏死提供新的思路。

本发明是这样实现的，一种Dickkopf-1与细胞凋亡在激素性股骨头缺血性坏死中作用的研究方法通过收集经全髋置换术取下的SANFH的股骨头标本作为实验组，股骨颈骨折髋关节置换术后标本作为对照组，切取股骨头标本经固定、脱钙，制作切片，电镜观察骨细胞形态变化，光镜观察其病理变化，并用HE染色计数空缺骨陷窝，免疫组织化学染色法检测Dickkopf-1的表达，用TUNEL凋亡检测试剂盒检测骨细胞凋亡，探索Dickkopf-1与细胞凋亡在SANFH中的作用。

进一步，Dickkopf-1与细胞凋亡在激素性股骨头缺血性坏死中作用的研究方法的具体步骤如下：