[发明专利]一种伊蚊A型和库蚊沃尔巴克氏体的荧光检测引物及其检测方法和检测试剂盒在审
| 申请号： | 201510318788.5 | 申请日： | 2015-06-11 |
| 公开（公告）号： | CN104878108A | 公开（公告）日： | 2015-09-02 |
| 发明（设计）人： | 高秀洁;杨翠;周其伟;李丽梅;奚志勇;朱俭;罗永平 | 申请（专利权）人： | 奚志勇 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/01 |
| 代理公司： | 广州科粤专利商标代理有限公司 44001 | 代理人： | 刘明星 |
| 地址： | 510663 广东省广州市高新技术产业*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 库蚊沃尔 巴克 荧光 检测 引物 及其 方法 试剂盒 | ||
1.一种伊蚊A型和库蚊沃尔巴克氏体的荧光检测引物，其特征在于，包括
(1)针对伊蚊A型沃尔巴克氏体：
wAlbAF：5’-GACATCAGGGTTGATGTTGA-3’；
wAlbAR：5’-GGAGTGATAGGCATATCTTCAAT-3’；
探针A：5’-ATTTACCCCAGCAGATACTATTGCG-3’；
探针A的两端分别结合有荧光发生基团FAM和荧光淬灭基团BHQ1；
(2)针对库蚊沃尔巴克氏体：
wPipF：5’-GCAGGGCTATATTTTGGG-3’；
wPipR：5’-ATCAGTTTCTAGGTCATT-3’；
探针B：5’-TCATCTATTAATAAAATAGGAGTATTACTAT-3’；
探针B的两端分别结合有荧光发生基团HEX和荧光淬灭基团BHQ1。
2.一种非疾病的诊断和治疗目的的伊蚊A型和库蚊沃尔巴克氏体的检测方法，其特征在于，提取样品DNA，以该样品DNA为模板，使用权利要求1所述的伊蚊A型和库蚊沃尔巴克氏体的荧光检测引物wAlbAF、wAlbAR、探针A、wPipF、wPipR和探针B，进行荧光定量PCR扩增，扩增反应完成后，根据探针标记的荧光发生基团的荧光信号，读取并记录样品的PCR循环次数Ct，根据样品的Ct值，按照建立的判断标准，判断样品是否含有伊蚊A型和库蚊沃尔巴克氏体。
3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述的进行荧光定量PCR扩增，其反应条件为：预变性50℃5分钟，95℃15分钟；扩增94℃15秒、55℃45秒，40个循环；55℃的时候收集荧光信号。
4.一种伊蚊A型和库蚊沃尔巴克氏体的检测试剂盒，包括荧光检测引物和PCR试剂，其特征在于，所述的荧光检测引物包括
(1)针对伊蚊A型沃尔巴克氏体：
wAlbAF：5’-GACATCAGGGTTGATGTTGA-3’；
wAlbAR：5’-GGAGTGATAGGCATATCTTCAAT-3’；
探针A：5’-ATTTACCCCAGCAGATACTATTGCG-3’；
探针A的两端分别结合有荧光发生基团FAM和荧光淬灭基团BHQ1；
(2)针对库蚊沃尔巴克氏体：
wPipF：5’-GCAGGGCTATATTTTGGG-3’；
wPipR：5’-ATCAGTTTCTAGGTCATT-3’；
探针B：5’-TCATCTATTAATAAAATAGGAGTATTACTAT-3’；
探针B的两端分别结合有荧光发生基团HEX和荧光淬灭基团BHQ1。
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