[发明专利]一种用于特异抑制ESCCAL_1表达的干涉RNA及其应用

权利要求书

1.一种用于特异抑制ESCCAL_1表达干涉RNA，其特征在于：所述的干涉RNA序列SEQ ID NO.5所示。

2.一种利用权利要求1所述的干涉RNA制备干涉细胞株的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将权利要求1所述的干涉RNA合成双链DNA；

（2）通过T4DNA连接酶将双酶切线性化的RNAi慢病毒载体GV112和步骤（1）合成的双链DNA进行连接转化，制备感受态细胞；

（3）制备编码慢病毒颗粒的重组病毒质粒及其两种辅助包装原件载体质粒，三种质粒载体分别进行高纯度无内毒素抽提，共转染293T细胞，培养后收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液，对其浓缩后得到高滴度的慢病毒浓缩液；

（4）将慢病毒颗粒感染EC9706细胞，筛选出ESCCAL_1稳定干涉的细胞株。

3.根据权利要求2所述的制备干涉细胞株的方法，其特征在于，步骤（1）中合成双链DNA的方法为将干涉RNA溶解于退火缓冲液中，90℃水浴15分钟，然后自然冷却至室温，TTTTTG是终止信号。

4.根据权利要求2所述的制备干涉细胞株的方法，其特征在于，步骤（2）中连接反应体系为：1μL线性化的载体DNA 100ng/μL、1μL DNA oligo 100ng/μL、2μL 10XT4噬菌体DNA连接酶缓冲液、1μL T4噬菌体连接酶，反应体系为20μL。

5.根据权利要求2所述的制备干涉细胞株的方法，其特征在于，步骤（3）中共转染后8h更换为完全培养基，培养48h。

6.一种抗肿瘤药物，其特征在于：包括权利要求1所述的干涉RNA。