[发明专利]一种Pb2+含量的测定方法

权利要求书

1.一种Pb²⁺含量的测定方法，其特征是包括以下步骤：

1.1 磁珠的前期处理，取10μL链霉亲和素修饰的磁珠至1mL离心管中，并用100μL pH8.0的Tris-HCl缓冲溶液清洗两遍；

1.2 发卡DNA1的预处理，发卡DNA1在使用之前在95℃孵化2min，并逐步降至室温备用；

1.3 发卡DNA1在磁珠表面的固定，将100μL pH 6.8的磷酸缓冲溶液加入到盛有10μL磁珠的1mL离心管中，并加入10μL 1.00×10^-5M生物素修饰的发卡DNA1链，在37℃下振荡反应30min，得发卡DNA1修饰的磁珠，并用磷酸缓冲溶液洗涤3遍，并分散于100μL的磷酸缓冲溶液中；

1.4 Pb²⁺含量的测定，再加入含Pb²⁺样品，发卡DNA1的发卡结构被打开，并生成Pb²⁺-G四链体的稳定结构，再加入标记探针DNA2链后，在足点域作用下，DNA2与G四链体碱基配对，Pb²⁺-G四链体结构被破坏，打开G四链体，释放出Pb²⁺，使Pb²⁺再与未反应的发卡DNA1作用，使得Pb²⁺循环利用，同时标记探针DNA2留在磁珠上，通过光二极管诱导化学发光检测化学发光信号，从而实现Pb²⁺含量的测定；具体步骤为，将100μL含有Pb²⁺的样品溶液加入到100μL发卡DNA1修饰的磁珠中；37℃下震荡反应30分钟；然后，加入100μL 1.0×10^-5M的FITC标记的DNA2溶液，37℃下震荡4小时，然后磁性分离，弃去清液，将磁珠用磷酸缓冲溶液洗涤两次，然后将所得磁珠分散于100μL磷酸缓冲溶液中；取200μL pH 11.3，浓度为0.01M的鲁米诺溶液于小烧杯中，并加入上述所得的50μL磁珠溶液；打开光二极管电源，照射15秒后关闭电源，然后测定化学发光强度，根据化学发光强度实现对Pb²⁺的测定；

其中，DNA序列为：

发卡DNA1：5’-biotin-ATCCGATCGGATACCCGGGTGGGTGGGTGGGTATCCGA-3’；

DNA2：5’-TCGGATACCCACCCACCCACCCG-FITC-3’。