[发明专利]一种Pb2+含量的测定方法

说明书

一种Pb²⁺含量的测定方法，属于化学发光技术领域，利用末端含富G寡核苷酸链的发卡DNA1修饰磁珠制备DNA1修饰磁珠DNA1‑MB，当含Pb²⁺样品加入DNA1‑MB中后，形成Pb²⁺‑G四链体结构；再加入DNA2后，DNA2的5’端与G四链体结构3’端单链部分杂交形成足点域，在足点域的作用下DNA2未杂交的部分与G四链体未杂交部分继续进行杂交形成双链DNA，将Pb²⁺替换下来进行下一个G四链体结构的形成，如此Pb²⁺被循环利用，同时将大量的DNA2附着在磁珠上，利用光二极管诱导化学发光原理，利用化学发光仪检测化学发光强度，根据化学发光强度实现对Pb²⁺的测定。本发明方法简单、成本低、灵敏度高。

技术领域

本发明属于化学发光技术领域，具体为一种Pb²⁺含量的测定方法。

背景技术

随着金属制品、汽油、蓄电池、化学涂料等产品使用量的不断增加以及工农业三废的排放，铅以多种途径广泛进入到人们的生活环境中，并呈加剧趋势，不仅直接影响农作物的生长发育、产量、品质等，而且间接通过食物链对人体健康造成严重的危害，铅污染已经引起了广泛关注。传统的重金属铅检测技术已经难以满足环境与食品安全监控的需求，因此，建立方便、快速的重金属铅的检测技术十分必要。

目前测定Pb²⁺的传统方法灵敏度不高，操作复杂，不容易满足实际检测要求。常用的铅的检测方法有原子吸收光谱法(李宏卫，曹建劲，苏志华，等.铅检测方法研究进展[J].安徽农业科学，2008，36(19)：8255～8256，8262)；分子信标核酸检测技术(毛华伟，赵晓东，杨锡强.脱氧核酶研究进展[J].中国生物工程杂志,2003,23(4)：43～47)，化学发光法(Xiang Li,Gongke Wang,Xuelian Ding,Yuhan Chen,Yaping Gou and Yan Lu.A turn-onfluorescent sensor for detection of Pb²⁺based on graphene oxide and G-quadruplex DNA.Phys. Chem.Chem.Phys,2013,15,12800-12804)。这些方法各有其优点，能不同程度的满足对Pb²⁺的检测要求，但方法的灵敏度不高、操作复杂。所以必须发展一种灵敏度高，简单的新型检测方法。

发明内容

鉴于现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种Pb²⁺含量的测定方法。

本发明是通过以下措施来实现的：

(1)利用链霉亲和素与生物素的作用将生物素修饰的DNA1与链霉亲和素修饰磁珠进行交联制备发卡DNA1修饰磁珠DNA1-MB；

(2)利用Pb²⁺可以诱导富G寡核苷酸链形成G四链体结构的特征，当含Pb²⁺样品加入DNA1-MB中后，富G寡核苷酸链形成G四链体结构；然后，加入标记探针DNA2后，DNA2 的5’端与G四链体结构3’端单链部分杂交形成足点域，在足点域的作用下DNA2未杂交的部分与G四链体未杂交部分继续进行杂交反应，形成双链DNA，将DNA2附着在磁珠上，同时，将Pb²⁺替换下来，被替换下来的Pb²⁺进行下一个G四链体结构的形成，并使另外一条 DNA2附着在磁珠上，如此Pb²⁺被循环利用，同时将大量的DNA2附着在磁珠上，利用光二极管诱导化学发光原理，利用化学发光仪检测化学发光强度，根据化学发光强度实现对Pb²⁺的测定。

本发明所建立的一种Pb²⁺含量的测定方法，其特征是：