[发明专利]一种检测17β-雌二醇的方法

权利要求书

1.一种检测17β-雌二醇的方法，其特征在于包括以下步骤：

1）一个制备17β-雌二醇功能核酸适配体的步骤，所述的功能核酸适配体为一段功能核苷酸序列，所述的功能核苷酸的序列如SEQ ID NO:1所示；

2）在适配体溶液中加入纳米金溶液，混匀孵育，使得适配体包裹在纳米金的表面，再加入待测17β-雌二醇的水溶液和丙磺酸缓冲液，混匀孵育，加入氯化钠溶液，再加入罗丹明B溶液，混匀后在570 nm波长处测定荧光信号强度来判断待测溶液中17β-雌二醇的含量。

2.根据权利要求1所述的一种检测17β-雌二醇的方法，其特征在于：上述步骤(1)中，将功能核苷酸适配体配制成1 μmol/L的母液，步骤（2）中氯化钠配制成浓度为2 mol/L的母液、罗丹明B配制成500 μmol/L的母液。

3.根据权利要求1所述的一种检测17β-雌二醇的方法，其特征在于：所述的纳米金通过以下方法制备：在100 mL煮沸的质量百分比浓度为0.01%的氯金酸溶液中，加入3.5 mL质量百分比浓度为1%的柠檬酸三钠溶液，搅拌30分钟，移除加热装置后继续搅拌混合物10分钟，最后，使溶液达到室温并且使用0.2 μm超滤膜过滤，然后储存在恒温为4℃的黑色玻璃瓶中备用。

4.根据权利要求1所述的一种检测17β-雌二醇的方法，其特征在于：步骤(1)中，检测体系中功能核苷酸的终浓度为40 nmol/L，纳米金的使用量为100 μL，步骤（2）中，检测体系中氯化钠的浓度为140 mmol/L，罗丹明B的浓度为10 μmol/L。

5.根据权利要求1所述的一种检测17β-雌二醇的方法，其特征在于：还包括以下步骤：

1）建立已知17β-雌二醇浓度的检测体系的步骤，取11支分别加入20 μL，1 μmol/L 17β-雌二醇功能核酸适配体的离心管，加入100 μL纳米金溶液，充分混匀后将离心管置于25℃条件下孵育20 min，然后分别加入10μL不同浓度的17β-雌二醇溶液和丙磺酸缓冲液，使得整个检测体系中17β-雌二醇溶液浓度维持在1000 nmol/L以下，充分混匀后再将离心管置于25℃条件下孵育20 min，在上述混合液中加入35 μL、2 mol/L的氯化钠溶液和25 μL、200 μmol/L的罗丹明B溶液，充分混匀，使得检测体系溶液总体积达到500 μL，留作以下测定用；

2）另取1支离心管将17β-雌二醇溶液用10 μL超纯水替代，按照上述步骤(1)的方法处理后作为空白对照体系溶液；

3）分别取500 μL步骤(1)和步骤(2)制备的标准溶液和空白对照液，置于石英荧光比色皿中，所述的石英荧光比色皿的内径为0.5 cm × 0.5 cm，外径为1.0 cm × 1.0 cm，用荧光分光光度计进行扫描测定信号，扫描条件为：激发光狭缝为10 nm，发射光狭缝为2.5 nm，激发光波长为520 nm条件下扫描，获得其荧光光谱信号，17β-雌二醇和空白对照液的荧光强度信号分别为F和F₀，计算增强的荧光强度值?F=F-F₀；

4）以不同浓度17β-雌二醇与对应增强荧光强度值?F作图，绘制标准曲线；

5）制备样品检测体系：取10μL待测样品，加入到步骤(1)方法制备的检测体系离心管中，充分混匀后再将离心管置于25℃条件下孵育20 min后，在混合液中加入30μL、2mol/L的氯化钠溶液和25 μL、200 μmol/L的罗丹明B溶液，混匀至检测体系总体积达到500μL，按步骤(3)方法测定荧光信号并计算?F；

6）根据计算所得的?F值，查标准曲线，可以求得样品中17β-雌二醇含量。

6.根据权利要求5所述的一种检测17β-雌二醇的方法，其特征在于：所述的缓冲液为丙磺酸缓冲液，浓度为10 mmol/L，PH值为7.0。