[发明专利]一种海南捕鸟蛛毒素III的制备方法

权利要求书

1.一种海南捕鸟蛛毒素III的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

选用Rink Amide树脂，利用Fmoc氨基保护和侧链保护氨基酸为原料，按照海南捕鸟蛛毒素III的序列依次固相合成，第2位和第17位半胱氨酸采用Fmoc-Cys(Mmt)-OH；

多肽序列合成完成后，采用1-3% TFA选择性去Mmt保护；

采用空气氧化法在树脂上第2位和第17位半胱氨酸形成二硫键；

90% TFA裂解树脂获得含一对二硫键多肽，制备色谱纯化，冷冻干燥；

纯化的含一对二硫键多肽采用固相DTNB氧化复性，形成第二对和第三对二硫键；

制备色谱纯化，冷冻干燥获得海南捕鸟蛛毒素III纯品。

2.如权利要求1所述的海南捕鸟蛛毒素III的制备方法，其特征在于：所述步骤A)中所述Rink Amide树脂替代度为0.3-0.8 mmoL/g。

3.如权利要求1所述的海南捕鸟蛛毒素III的制备方法，其特征在于：所述步骤A)中所述依次偶联采用HATU/HOBt/NMM，每步的脱保护试剂为20% 哌啶/DMF溶液。

4. 如权利要求1所述的海南捕鸟蛛毒素III的制备方法，其特征在于：所述步骤B)中所述选择性去Mmt保护采用1-3% TFA，去保护时间为30-10 分钟。

5. 如权利要求1所述的海南捕鸟蛛毒素III的制备方法，其特征在于：所述步骤C）中所述二硫键形成采用空气氧化法。

6. 如权利要求1所述的海南捕鸟蛛毒素III的制备方法，其特征在于：所述步骤D）中所述多肽从树脂上裂解下来采用90% TFA/5% 苯酚/2.5% TIS/2.5% 水。

7. 如权利要求1所述的海南捕鸟蛛毒素III的制备方法，其特征在于：所述步骤D）和F)中所述多肽纯化采用制备色谱进行纯化，色谱柱为C18柱，A液为0.1% TFA 水溶液，B液为0.1% TFA乙腈溶液，梯度洗脱，检测波长为280 nm，收集产物，冷冻干燥。

8. 如权利要求1所述的海南捕鸟蛛毒素III的制备方法，其特征在于：所述步骤E）中所述第二对和第三对二硫键的形成采用固相DTNP氧化。