[发明专利]完整获取植物组织中核糖体新生肽链复合物的方法与应用

权利要求书

1.一种完整获取植物组织中核糖体新生肽链复合物的方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）用水将新鲜的植物组织清洗干净，用液氮进行冷冻处理至植物组织的温度低于-80℃；

（2）将步骤（1）冷冻处理好的植物组织存储于不高于-80℃的环境，在该条件下，能进行稳定的储存、运输；

（3）从步骤（1）冷冻处理好的植物组织或是步骤（2）进行储存、运输的植物组织中提取核糖体新生肽链复合物时，步骤如下：

①在研钵内加液氮对植物组织进行研磨，得到粉末；

②保持在液氮环境下往粉末中加入预冷至0～6℃的细胞裂解液，继续研磨混匀；然后置于冰上等待完全融化，进行裂解反应；细胞裂解液的组成如下：190～210 mM、pH 7.8～8.2的Tris-HCl，45～55 mM MgCl₂，390～410 mM KCl，0.05～0.15 mg/mL 放线菌酮，4～6mM 二硫苏糖醇，体积百分比0.5～1.5 %的Triton X-100；

③离心，取上清进行核糖体新生肽链复合物的提取，得到植物组织中的核糖体新生肽链复合物。

2.根据权利要求1所述的完整获取植物组织中核糖体新生肽链复合物的方法，其特征在于：步骤（1）中所述新鲜的植物组织通过如下步骤得到：从植物体上分离植物组织，控制在5 min以内完成，得到新鲜的植物组织。

3.根据权利要求1所述的完整获取植物组织中核糖体新生肽链复合物的方法，其特征在于：

步骤（1）中所述的清洗的次数为1～2遍；

步骤（1）中所述的水为电导率不超过20 μS/cm的水；

步骤（1）中所述的冷冻处理为将植物组织完全浸入液氮中进行冷冻处理。

4.根据权利要求3所述的完整获取植物组织中核糖体新生肽链复合物的方法，其特征在于：所述的电导率不超过20 μS/cm的水为蒸馏水或超纯水。

5.根据权利要求1所述的完整获取植物组织中核糖体新生肽链复合物的方法，其特征在于：

步骤（1）中所述的新鲜的植物组织在用水清洗干净后、用液氮进行冷冻处理前还进行如下处理：去除新鲜的植物组织表面的水分。

6.根据权利要求5所述的完整获取植物组织中核糖体新生肽链复合物的方法，其特征在于：所述的去除新鲜的植物组织表面的水分通过使用洁净的滤纸实现。

7.根据权利要求1所述的完整获取植物组织中核糖体新生肽链复合物的方法，其特征在于：步骤（2）中所述的不高于-80℃的环境为-196℃～-80℃的环境。

8.根据权利要求1所述的完整获取植物组织中核糖体新生肽链复合物的方法，其特征在于：

步骤（3）中所述的继续研磨的时间为1～5 min；

步骤（3）中所述的离心的条件为4℃、16200×g离心至少10 min；

步骤（3）中所述的核糖体新生肽链复合物的提取的方法为蔗糖密度梯度离心法。

9.根据权利要求1所述的完整获取植物组织中核糖体新生肽链复合物的方法，其特征在于：

步骤（3）中所述的细胞裂解液的组成如下：200 mM、pH 8.0的Tris-HCl，50 mM MgCl₂，400 mM KCl，0.1 mg/mL 放线菌酮，5 mM 二硫苏糖醇，体积百分比1 %的Triton X-100。

10.权利要求1～9任一项所述的完整获取植物组织中核糖体新生肽链复合物的方法在基因功能分析中的应用。