[发明专利]完整获取植物组织中核糖体新生肽链复合物的方法与应用

说明书

本发明公开一种完整获取植物组织中核糖体新生肽链复合物的方法与应用。该方法的步骤为：用水将新鲜的植物组织清洗干净，用液氮速冻处理至植物组织的温度低于‑80℃，后提取RNC；或是将液氮速冻的植物组织存储于不高于‑80℃的环境，在该条件下进行稳定的储存、运输后再提取RNC；提取RNC的步骤为：加液氮对植物组织进行研磨，得到粉末；保持在液氮环境下往粉末中加入预冷的细胞裂解液，研磨混匀；置于冰上等待融化后进行裂解反应；离心，取上清进行RNC的提取，得到RNC。该方法可方便有效地获取植物组织样品的RNC；且满足RNC样品的长期储存与运输的需要，便于分析基因功能。

技术领域

本发明属于生命科学技术领域，特别涉及一种完整获取植物组织中核糖体新生肽链复合物的方法与应用。

背景技术

目前对植物基因表达水平的考察大多停留在转录层次上，即检测基因表达均为检测直接由细胞破碎，进而抽提得来总RNA，通过检测总RNA中的mRNA量来作为基因的表达量，然而一直以来基因的表达量不能等同于蛋白的表达量，在植物界一直以来是一个悬而未决的问题。

近年来发现翻译调控是生命体内的一个重要调控层次。mRNA进行翻译时，核糖体结合在mRNA链上并移动，依据mRNA上的密码子信息来逐步合成蛋白质多肽链(新生肽链，Nascent-chain)，这一复合物称为核糖体新生肽链复合物(Ribosome Nascent-chainComplex,RNC)。在细胞中，在翻译调控多种机制的调节下，一些基因进入翻译的比例高、有些基因进入翻译的比例低，还有部分基因完全不进入核糖体起始翻译，由此可知对细胞中mRNA的翻译状况进行研究显得极为必要。只有完整提取了RNC，才能对正在翻译的mRNA进行定性定量研究，因此，完整提取RNC对研究和应用都有重要的意义。

研究发现正在翻译的RNC-mRNA含量与细胞内蛋白质的含量之间存在较高相关性(Wang et al.,Translating mRNAs strongly correlate to proteins in amultivariate manner and their translation ratios are phenotypespecific.Nucleic acids research 41,4743-4754,2013)，因而对正在翻译的RNC-mRNA含量进行测定(翻译组测序)，结合对同一样品的转录组测序，可准确推算出细胞内翻译效率与蛋白质表达量，从而表征细胞的各种表型(Wang et al.,2013，下文中凡简写，均为文献名称已在背景技术提及过)、发现未知蛋白(Zhang et al.How to discover newproteins-translatome profiling.Science China Life sciences 57,358-360，2014b)，对蛋白质组研究也有重要的指导意义(Chang et al.Systematic analyses of thetranscriptome,translatome,and proteome provide a global view and potentialstrategy for the C-HPP.Journal of proteome research 13,38-49，2014；Liu etal.Chromosome-8-coded proteome of Chinese Chromosome Proteome Data set(CCPD)2.0with partial immunohistochemical verifications.Journal of proteomeresearch 13,126-136,2014；Wang et al.Omics evidence:single nucleotide variantstransmissions on chromosome 20in liver cancer cell lines.Journal of proteomeresearch 13,200-211,2014；Zhang et al.Systematic analysis of missing proteinsprovides clues to help define all of the protein-coding genes on humanchromosome 1.Journal of proteome research 13,114-125,2014a；Zhong etal.Resolving chromosome-centric human proteome with translating mRNAanalysis:a strategic demonstration.Journal of proteome research 13,50-59，2014)，被列为人类蛋白质组计划的第四支柱(Zhong et al.Resolving chromosome-centric human proteome with translating mRNA analysis:a strategicdemonstration.Journal of proteome research 13,50-59，2014)。