[发明专利]一种用于动物组织基因组RNA快速提取试剂盒及提取方法和应用

权利要求书

1.一种用于动物组织基因组RNA快速提取试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括以下试剂：裂解液、冲洗液1、冲洗液2、无水乙醇和重量比0.5~1.5%的焦碳酸二乙酯水溶液，其中裂解液、冲洗液1、冲洗液2的成分为：

裂解液：浓度为40~60 mM 的Tris-HCl，重量比0.5~1.5%的溴化十六烷基三甲胺，重量比0.5~1.5%的十二烷基肌氨酸，重量比3~7%的聚乙烯基吡咯烷酮，浓度为0.35~1.25 M 的氯化钠；

冲洗液1：浓度为5~15 mM 的EDTA，体积比70%的乙醇，pH 7.0；

冲洗液2：浓度为40~60 mM的 Tris-HCl，体积比75%的乙醇，pH 7.0。

2.根据权利要求1所述的用于动物组织基因组RNA快速提取试剂盒，其特征在于，其中：焦碳酸二乙酯水溶液的浓度为1%；

裂解液：浓度为50 mM 的Tris-HCl，重量比1%的溴化十六烷基三甲胺，重量比1%的十二烷基肌氨酸，重量比5%的聚乙烯基吡咯烷酮，浓度为0.7 M 的氯化钠；

冲洗液1：浓度为10 mM 的EDTA，体积比70%的乙醇，pH 7.0；

冲洗液2：浓度为50 mM 的Tris-HCl，体积比75%的乙醇，pH 7.0。

3.一种利用权利要求1或2 的RNA快速提取试剂盒提取动物组织基因组的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

（1）将固体状的动物组织先进行研磨处理，液体状的动物组织直接用于提取；

（1）取液体状20 μl~100 μl 的动物组织，或取研磨后成糊状的动物组织20 mg~100 mg，加500 μl 裂解液，70℃水浴2 min，12000 rpm 30 S，分离出上清液；

（2）将上清液转入离心管中，加500 μl 无水乙醇，分次转到RNA纯化柱上，12000 rpm 离心30 S；得到粗提的RNA----，倒掉收集管中的废液；

（3）用500 μl 冲洗液1冲洗纯化柱，12000 rpm离心30 S，倒掉收集管中的废液；

（4）用600 μl 冲洗液2冲洗纯化柱，12000 rpm 离心30 S，倒掉收集管中的废液；

（5）用500 μl 冲洗液2冲洗纯化柱，12000 rpm离心30 S，倒掉收集管中的废液；

（6）再次12000 rpm离心30 S；

（7）将RNA纯化柱转到另一离心管，加50 μl 焦碳酸二乙酯水溶液，12000 rpm 离心30 S，即可得到病毒及组织基因组的RNA，于-20℃保存备用。

4.根据权利要求3的所述RNA快速提取试剂盒提取动物组织基因组的方法，其特征在于，所述固体状的动物组织为心脏、肝脏、肺脏、脾脏或肾脏；所述液体状的动物组织为全血、血浆、血清或动物分泌物。

5.权利要求1或2所述的试剂盒在用于动物组织基因组RNA快速提取中的应用。