[发明专利]一种用于动物组织基因组RNA快速提取试剂盒及提取方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于动物组织基因组RNA快速提取试剂盒及提取方法和应用，属于生物技术领域。

背景技术

分子生物学研究中提取纯化RNA是分子试验的第一步，各种临床检测或科研中均需要提取纯化RNA。目前，国内外已有多种基于RT-PCR技术检测RNA的试剂盒应用于临床诊断和检测中，这些试剂盒所提供的RNA提取方法主要是苯酚-氯仿提取法。苯酚和氯仿是RNA提取过程的变性剂，反复抽提可以去除蛋白质、盐类和杂质。但苯酚和氯仿对人体有较大的毒性，挥发性较强，并且整个提取过程步骤繁琐，耗时较长，往往容易导致RNA降解，并且增加能耗和试验成本，对下游实验往往造成不利的影响。

全基因组是细胞或组织中包括编码序列和非编码序列在内的全部基因信息。几乎所有的生命信息均可以从全基因组中发现，包括与动物疾病相关的基因表达与调控。目前，病原学检测与分子诊断是临床检测中常见的技术，其敏感性与特异性与RNA提取的纯度和浓度有很大关系，直接决定了检测的结果。在动物疾病检测与分子诊断中，高灵敏度与特异性的分子诊断已逐步取代血清学检查。因而，获取高纯度与高浓度的基因组RNA是动物病原菌科研和临床检测中的第一步，其决定了扩增结合和诊断的特异性。

RNA提取是分子生物学研究中常用的一种技术，目前市场上有多种RNA提取方法。动物组织中含有大量的蛋白质、盐类及杂质，其性质与核酸的性质非常相似，难以从提取的RNA中分离出，在动物组织RNA提取的过程中，很容易与RNA共同沉淀，并且难以分离，往往造成提取的RNA纯度和浓度不够，影响了后续的扩增和测序。

为降低或清除动物组织中的蛋白质、盐类及杂质，现有的RNA提取过程中常常有污染，并且步骤繁琐，提取时间较长，如高氯酸钠法、SDS法和尿素法等提取方法，同时这些方法需要的样本量较大，并且苯酚类等有机物容易在RNA溶液中残留，特别是在后续的RT-PCR扩增过程中会干扰扩增过程，影响扩增结果，使得这些方法的应用受到限制。

对于动物组织而言，采用分子生物学法研究其病原菌诊断，首先要进行的是样品中细菌或病毒的RNA提取。能获取不同种类病毒的RNA，以及基因组的完整性、纯度和浓度，是从动物组织中提取RNA用于动物病原菌诊断研究的首要目标。因此，需要一种适于用于动物基因组RNA快速提取试剂盒，才能满足当前快速分子诊断的需求，保障畜牧业的健康发展。

发明内容

本发明的目的：在于提供一种用于动物组织基因组RNA快速提取试剂盒，本试剂盒试剂组成简化，操作简便、省工省时，整个提取过程只需5分钟，可以满足样品较多和快速提取RNA的需求，为动物病原菌快速诊断和养殖业的健康发展提供技术支持和理论基础。

还提供了所述的用于动物组织基因组RNA的快速提取试剂盒的提取方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：

    一种用于动物组织基因组RNA快速提取试剂盒，包括以下试剂：裂解液、冲洗液1、冲洗液2、无水乙醇和重量比0.5~1.5%的焦碳酸二乙酯水溶液，其中裂解液、冲洗液1、冲洗液2的成分为：

裂解液：浓度为40~60 mM 的Tris-HCl，重量比0.5~1.5%的溴化十六烷基三甲胺，重量比0.5~1.5%的十二烷基肌氨酸，重量比3~7%的聚乙烯基吡咯烷酮，浓度为0.35~1.25 M 的氯化钠；

冲洗液1：浓度为5~15 mM 的EDTA，体积比70%的乙醇，pH 7.0；

冲洗液2：浓度为40~60 mM的 Tris-HCl，体积比75%的乙醇，pH 7.0。

    所述的用于动物组织基因组RNA快速提取试剂盒中：焦碳酸二乙酯水溶液的浓度为1%；

     裂解液：浓度为50 mM 的Tris-HCl，重量比1%的溴化十六烷基三甲胺，重量比1%的十二烷基肌氨酸，重量比5%的聚乙烯基吡咯烷酮，浓度为0.7 M 的氯化钠；

     冲洗液1：浓度为10 mM 的EDTA，体积比70%的乙醇，pH 7.0；

     冲洗液2：浓度为50 mM 的Tris-HCl，体积比75%的乙醇，pH 7.0。

     一种利用RNA快速提取试剂盒提取动物组织基因组的方法，包括以下步骤：

    （1）将固体状的动物组织先进行研磨处理，液体状的动物组织直接用于提取；