[发明专利]从龙眼肉中分离木犀草素5‑O‑β‑葡萄糖苷的方法

说明书

技术领域

本发明涉及龙眼肉中分离酚类化合物的方法，尤其涉及从龙眼肉中分离木犀草素5-O-β-葡萄糖苷的方法。

背景技术

龙眼被誉为“果中圣品”，有“南方人参”的美称，在我国栽培历史悠久，主要分布于福建、广西、广东、四川和台湾省，是我国南方的特色大宗水果，其中广东省龙眼种植面积12.9万公顷，年产55.48万吨，对当地农业和经济发展起重要作用。龙眼果肉不仅营养丰富，并且具有很高的药用功效。《本草纲目》中记载“食品以荔枝为贵，而资益以龙眼为良”，认为龙眼肉具有“开胃健脾，补虚益智”的功效。中医学著作中也有记载，龙眼果肉可用于治疗脾虚泄泻，自汗盗汗，心血不足，失眠健忘等症状。已有研究人员对荔枝果肉生物活性做了初步探索，报道荔枝果肉富含酚类物质具有抗氧化、抗辐射和保护肝脏等生物活性。

龙眼资源在我国华南地区非常丰富，如果对龙眼果肉进行深入系统的研究，确定其抗氧化作用物质基础、鉴定其单体的化学结构、明析其作用机理，并在此基础上开发出可降低慢性疾病发生发展的功能食品，不仅可以充分利用龙眼资源，而且还可以减少慢性疾病的发病率、促进人们的健康水平、创造出较大的经济效益和社会效益。已有研究表明，龙眼果肉中含有丰富的酚类化合物，目前已从龙眼果肉中分离得到的酚类化合物(见下式和表1)。大量试验表明龙眼果肉中的酚类化合物有较强的抗氧化、延缓衰老功效，是龙眼果肉抗氧化活性的主要功效物质。Rangkadilok等用70％甲醇从龙眼果肉中提取得到的酚类物质主要为没食子酸、鞣花单宁、鞣花酸(Rangkadilok et al.，2005)。Jian Sun用聚酰胺柱和Sephadex LH-20凝胶柱层析法分离纯化果肉中酚类物质，鉴定得到4-O-甲基没食子酸和(-)-表儿茶素(Jian et al.，2007)。其中4-O-甲基没食子酸表现出较高的DPPH和自由基清除活性，而后者证实与龙眼果肉的褐变反应相关。王志远采用普鲁士兰法测定了龙眼果肉70％丙酮提取物中多酚和单宁的含量分别约为0.90±0.06mg/g和0.56±0.06mg/g(王志远等，2008)。万红霞比较了不同浓度的甲醇、乙醇、丙酮对多酚提取含量的影响，结果显示以70％丙酮为提取剂时，多酚提取量达到最大，为51.5±1.4mg/100g(万红霞，2011)。肖毅美用HPLC的方法测定了不同品种龙眼果肉中酚类物质的组成和含量，发现酚类单体含量最大的是表儿茶素，其次是四甲基邻苯二酚和香豆素(肖毅美，2011)。酚类物质在抗氧化、延缓衰老等方面具有较强的作用，这与龙眼果肉的生理功效是一致的。

表1从龙眼果肉中分离出的酚类化合物

目前，没有人从龙眼果肉中分离得到木犀草素5-O-β-葡萄糖苷。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从龙眼肉中分离木犀草素5-O-β-葡萄糖苷的方法。该方法工艺简单，条件容易控制，易于产业化，为它在广泛范围内使用提供了方便。

本发明的目的通过以下技术方案来实现：从龙眼肉中分离木犀草素5-O-β-葡萄糖苷的方法，包括以下步骤：

(1)用丙酮提取龙眼果肉，获得丙酮提取物；

(2)所述丙酮提取物上大孔树脂分离柱，先后用超纯水和95％乙醇溶液进行洗脱，收集乙醇溶液，浓缩至乙醇完全回收；

(3)所述浓缩液上聚酰胺树脂柱，依次用水以及体积分数为10％、20％的乙醇进行梯度洗脱，而后采用体积分数为25-35％的乙醇进行洗脱，收集洗脱液；

(4)将25-35％乙醇的洗脱液注入高效液相色谱仪，用甲醇-水进行洗脱，收集含有木犀草素5-O-β-葡萄糖苷的级分，浓缩，干燥获得木犀草素5-O-β-葡萄糖苷。

本发明的一个实施方式，所述步骤(1)具体操作为：取鲜龙眼果肉，按质量体积比1:2-5加入4℃预冷的80％丙酮，破碎组织，之后用均质机在冰水浴下，4500-5500rpm均质4-6分钟，然后离心，取上清液，果渣重复提取一次，合并两次上清液，真空浓缩至40mL，-80℃冷藏备用。

所述离心转速4500-5500rpm。

所述步骤(2)中的超纯水和95％乙醇溶液的用量分别为2L。

所述步骤(3)中的水和乙醇的用量分别为2L。

所述步骤(4)中甲醇-水中甲醇和水体积比为45﹕55；流速5mL/min，所述干燥为冷冻干燥。

本发明的有益效果：