[发明专利]一种用于检测牛GART突变基因型的引物对和检测方法

权利要求书

1.一种用于检测牛GART突变基因型的引物对，其特征在于，所述引物对具体为：

上游引物GART-F：5’-GAAGGTGTCCTCTATGCTGG-3’；

下游引物GART-R：5’-TTTTAAGAAGTGGGAGGATC-3’。

2.一种检测牛GART突变基因型的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

1)PCR扩增：以待测样本基因组DNA为模板，利用权利要求1所述引物对进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；

2)扩增产物酶切：用限制性内切酶Mse I对PCR扩增产物进行酶切消化，得到酶切产物；

3)电泳检测：将酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳，通过观察酶切产物的电泳条带，判断待测样本的基因型。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，通过观察酶切产物的电泳条带是否存在长度为117bp的条带，判断待测样本是否为突变基因型。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，PCR反应体系以25μL计为：

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，PCR反应条件为：95℃预变性8min；95℃变性30sec，60℃退火30sec，72℃延伸1min，35个循环；最后72℃延伸10min。

6.根据权利要求2-5任一项所述的方法，其特征在于，酶切反应体系以20μL计为：

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，酶切反应条件为：在水浴锅中37℃消化2小时。

8.根据权利要求2-7任意一项所述的方法，其特征在于，所述扩增产物在进行酶切之前，利用凝胶电泳检测长度为276bp的条带存在。

9.根据权利要求2-8任意一项所述的方法，其特征在于，所述基因组DNA采用高盐法从牛冻精中提取。

10.一种含有权利要求1所述引物对的试剂盒。