[发明专利]一种渔用海洋微生态制剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及微生态制剂的技术领域，尤其涉及一种渔用海洋微生态制剂及其制备方法。

背景技术

目前水产养殖业存在着病害越来越严重，传统的抗生素和化工消毒剂难以为继，由此产生的养殖水体排放给养殖区带来了严重污染，从九十年代开始光合细菌在水产养殖上应用技术不断进步，近几年以来益生素在水产养殖上的应用方兴未艾，芽孢杆菌在养殖业上推广的技术日趋成熟，给微生物在水产养殖业上的应用提供了可借鉴的依据，中国台湾九十年代就把乳酸菌应用于养殖业，至今具备一定的应用水平，我国对乳酸菌的研究和应用只是刚刚开始，乳酸菌具有定植养殖动物肠道抑制病原菌和助消化吸收；消除水体的有机物，有害物质等特性，对水产养殖可持续发展提供了有力的保障。

植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)属于乳杆菌科,乳杆菌属，革兰氏阳性。植物乳杆菌是同型发酵乳酸菌，在发酵过程中只产生乳酸，是典型的兼性厌氧菌，有很强的发酵碳水化合物的能力，较耐盐，与其它乳酸菌有协同作用。戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)属于球菌，乳酸菌属，革兰氏阳性，兼性厌氧性，具有产酸高、性能稳定、降解效果佳、耐盐性较高等优势，常用于秸秆发酵及饲料添加剂。植物乳杆菌和戊糖片球菌是农业部2013年第2045号公告《饲料添加剂品种目录(2013)》中规定做为微生态制剂可以直接饲喂养殖动物的饲料级微生物添加剂菌种。植物乳杆菌和戊糖片球菌是乳酸菌的两个不同种类。

在现有技术中，植物乳杆菌和戊糖片球菌通常是被分别用来作为水产生物的微生物添加剂，对于两者的综合运用，还鲜有报道。有鉴于此，本发明人研究和设计了一种渔用海洋微生态制剂及其制备方法，本案由此产生。

发明内容

本发明的目的在于提供一种渔用海洋微生态制剂及其制备方法，本发明对植物乳杆菌 和戊糖片球菌，筛选出规模化生产的培养基配方，以提高饲料效率，进而促进植物乳杆菌和戊糖片球菌微生态制剂在水产养殖上的推广应用。

为实现上述目的，本发明解决其技术问题的技术方案是：

一种渔用海洋微生态制剂，包括植物乳杆菌及戊糖片球菌，所述植物乳杆菌及所述戊糖片球菌的菌数比为2:1。

一种渔用海洋微生态制剂的制备方法，包括以下步骤：

步骤一、菌种的活化与扩大培养：

一级培养：在超净工作台中取斜面保存单菌落至100ml灭菌MRS培养基中，置于35℃恒温水浴摇床上培养24h；植物乳杆菌和戊糖片球菌各接种4瓶，目的是活化菌种；24h后取菌液涂布MRS平板多个，置于35℃恒温箱内静置培养24h，待菌落长出，置于4℃冰箱保种，待用；

二级培养：在超净工作台中取斜面保存单菌落接种至200ml灭菌MRS中，两种菌各共接种6瓶，置于35℃恒温水浴摇床上培养24h；

三级培养：取培养好的菌液10ml至2000ml灭菌MRS培养基中，置于35℃恒温水浴摇床上培养24h，得到种子液，采用真空干燥法生产植物乳杆菌2kg、戊糖片球菌30kg，菌数均达亿级；

步骤二、发酵培养基的配制：

蛋白胨10g，牛肉浸膏10g，酵母浸膏5g，葡萄糖20g，磷酸氢二钾2g，乙酸钠2g，柠檬酸二钠2g，七水合硫酸镁0.5g，五水硫酸锰0.2g，吐温-801ml，定容至1L；

步骤三、发酵培养：

将所述植物乳杆菌及所述戊糖片球菌按菌数比为2:1的混合菌接种于所述发酵培养基，接种量为2％，所述发酵培养基中按C:N为12:1添加葡萄糖和大豆蛋白胨，发酵温度35℃、初始PH为6.5，搅拌为12h搅拌1次，每次搅拌时间为5min，以PH达到4.0以下为发酵 终点；

步骤四、过滤出料：

发酵至终点后，对发酵液进行过滤出料，再进行分装，制得本渔用海洋微生态制剂。

作为实施例的优选方式，所述混合菌的菌数为10亿/g。

本发明对植物乳杆菌和戊糖片球菌，筛选出了规模化生产的培养基配方，大大提高了饲料效率，植物乳杆菌和戊糖片球菌的代谢产物具有协同作用的能力，在生产应用中远远高于单体的效能，有效促进了植物乳杆菌和戊糖片球菌微生态制剂在水产养殖上的推广应用。

附图说明

图1两种乳酸菌的比例对其代谢产物的影响；

图2碳源对两种乳酸菌生长的影响；

图3氮源对两种乳酸菌生长的影响；

图4缓冲盐对两种乳酸菌生长的影响；

图5生长因子对两种乳酸菌生长的影响；

图6不同接种量对植物乳杆菌和戊糖片球菌发酵的影响；