[发明专利]检测SCML2的即用型快速酶免疫组织化学试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于医学生物技术领域，具体涉及检测SCML2的即用型快

速酶免疫组织化学试剂盒。

背景技术

SCML2是Montini等于1999年首先在果蝇的SCM基因Xp22染色体被鉴定出来，总长约15Kb，在C端为高度保守内含子和外显子的结构。SCML2在哺乳动物广泛表达并且编码一个700个氨基酸的蛋白。SCML2是多梳基因家族的一个成员，多梳家族基因编码一组染色体结合蛋白，研究表明它在胚胎发育过程中起到关键作用，它能抑制trxG蛋白对胚胎发育的活化作用。大多数的哺乳动物的多梳家族基因与果蝇同源，敲除老鼠的多梳家族基因，老鼠出现造血缺陷、神经嵴缺陷、心脏畸形。SCML2可能与HOX基因转录抑制有关，而后者的突变可导致发育畸形；并且SCML2与多疏蛋白抑制复合体的调节有关，后者与维持抑制和阻止染色体重塑有关，同时它在调控胚胎发育的同源基因中起着重要作用。近来部分临床研究资料也证实多梳家族基因与细胞增殖和肿瘤形成的调控有关，SCML2可在急性髓细胞白血病过度表达，进一步佐证其在细胞分化和细胞周期调控中起重要作用。

我们运用自建的SCML2即用型快速酶免疫组织化学试剂盒检测发现SCML2在人神经内分泌肿瘤组织中呈现高表达，并且它的表达水平与神经内分泌肿瘤的病理类型、病理分级、侵润深度及分期相关。我们的研究进一步发现，神经内分泌肿瘤中SCML2表达阳性率为90.6%，而癌旁组织及其他类型肿瘤中均不表达，差异有统计学意义，提示SCML2可能在神经内分泌肿瘤发生发展过程中起着较重要作用，且为神经内分泌肿瘤特异性诊断标志物。

快速酶免疫组织化学法与一般的免疫组化法比较，有以下几点优势：① 快速酶免疫组织化学法将二抗和酶联接成一个多聚体，可直接放大信号40～50倍，再与已经结合的一抗反应，最后显色剂显色，大大提高了检测敏感性及定位性；② 快速酶免疫组织化学法所使用的多聚物在组织中不含有，减少了非特异性背景；③快速酶免疫组织化学法以酶代替生物素与二抗连接，从而避免了组织中生物素的干扰；④快速酶免疫组织化学法染色步骤为两步，且第二抗体孵育时较短，比较省时。

本发明建立快速酶免疫组织化学法检测人组织标本中SCML2，该方法具有简易、快捷、灵敏、通用、重现性好的特点，为临床病理组织标本中SCML2的检测提供了良好的平台。

目前，国际上还没有相关报道，更没有专门用于检测SCML2的即用型快速酶免疫组织化学试剂盒提供，因此，该试剂盒的开发和应用，填补了这方面的空白。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种简易、快捷、灵敏、通用、重现性好的即用型快速酶免疫组织化学试剂盒，以此来确定人组织样本中SCML2抗原的表达水平和细胞定位情况。

为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：检测SCML2的即用型快速酶免疫组织化学试剂盒，其创新点在于：有盒体，盒体中包括以下容器：

（1）3%H₂O₂去离子水容器；

（2）粉剂型抗原修复液容器；

（3）粉剂型磷酸盐缓冲液容器；

（4）单克隆小鼠抗人SCML2抗体容器；

（5）聚合物增强剂容器；

（6）HRP酶标抗鼠IgG聚合物容器；

（7）二氨基联苯胺容器。

进一步的，所述盒体中试剂成分包括：

（1）3%H₂O₂去离子水容器中的试剂成分为3%H₂O₂；

（2）粉剂型抗原修复液容器中的试剂成分为粉剂型抗原修复液；

（3）粉剂型磷酸盐缓冲液容器中的试剂成分为粉剂型磷酸盐缓冲液；

（4）单克隆小鼠抗人SCML2抗体容器中的试剂成分为单克隆小鼠抗人SCML2抗体，储存浓度为0.2μg/μl；

（5）聚合物增强剂容器中的试剂成分为聚合物增强剂；

（6）HRP酶标抗鼠IgG聚合物容器中的试剂成分为HRP酶标抗鼠IgG聚合物；

（7）二氨基联苯胺容器中的试剂成分为二氨基联苯胺。

进一步的，所述使用方法包括以下步骤：

（1）切片和烤片：石蜡包埋组织5μm连续切片，贴于载玻片上，在电热恒温干燥箱内烘片1 h，所述烘片温度为67℃；