[发明专利]一种抗菌鸡卵黄复合抗体及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种制备抗菌鸡卵黄复合抗体的方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）分别制备口腔致病菌的免疫抗原；

（2）将健康母鸡分群，分别对每群健康母鸡免疫一种口腔致病菌的免疫抗原；

（3）分别收集每群免疫母鸡所产的免疫鸡蛋，并分别对免疫鸡蛋的蛋黄进行提取、纯化、分离，从而获得各单种菌的抗体原液；

（4）各单种菌的抗体原液按照抗体效价检测进行混合，并配加稳定剂制成抗菌鸡卵黄复合抗体。

2.根据权利要求1所述一种制备抗菌鸡卵黄复合抗体的方法，其特征在于：所述步骤（1）中，制备口腔致病菌的免疫抗原的具体过程为：

（1.1）从急性扁桃体炎患者炎症部位的咽拭子处获得口腔致病菌，接种于血平板或培养基；

（1.2）通过患者炎症部位症状判断，并进行细菌验证后，确定口腔中的主要致病菌包括乙型溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、大肠杆菌；

（1.3）分别扩大培养上述口腔致病菌，并调整到适宜浓度；

（1.4）将上述四种扩大培养的口腔致病菌均分成两份，一份通过0.5%甲醛溶液灭活24小时，另一份使口腔致病菌裂解；

（1.5）将灭活和裂解的相同种类的口腔致病菌混合，即得该种口腔致病菌的免疫抗原；

（1.6）根据步骤（1.5）所述，分别获得四种口腔致病菌的免疫抗原。

3.根据权利要求2所述的一种制备抗菌鸡卵黄复合抗体的方法，其特征在于：所述步骤（2）中，母鸡具体的免疫过程为：在口腔致病菌的免疫抗原中加入弗氏完全佐剂，对免疫抗原进行乳化，经过乳化并检验合格的免疫抗原对健康母鸡进行首次注射，间隔2、4、6、10周，使用弗氏不完全佐剂乳化的口腔致病菌免疫抗原，并在检验合格后，对健康母鸡进行注射，加强免疫。

4.根据权利要求1或2或3所述的一种制备抗菌鸡卵黄复合抗体的方法，其特征在于：所述步骤（3）中，对免疫鸡蛋的蛋黄进行提取、纯化、分离，获得单种菌抗体原液的具体步骤如下：

（3.1）收集获得免疫的健康母鸡产下的鸡蛋，分离蛋清蛋黄，去除蛋清，收集蛋黄称取重量；

（3.2）将蛋黄加入纯化水稀释匀浆，调至弱酸环境，静置1~24小时；

（3.3）静置后离心，取上层清液进行盐析，等待其沉淀；

（3.4）沉淀完成后，离心，取得沉淀制得卵黄抗体粗提物；

（3.5）加入弱酸性缓冲液复溶，调节pH令其充分溶解，静置1~24小时后，取上层清液；

（3.6）超滤，并进行病毒灭活；

（3.7）灭活后，取其上层清液，剩余的悬浊液进行离心分离，取上层清液进行合并，即得单种菌抗体原液。

5.根据权利要求4所述的一种制备抗菌鸡卵黄复合抗体的方法，其特征在于：所述步骤（3.6）中，病毒灭活过程为，将需要病毒灭活的溶液放置在温度为54~60℃的环境中，保持8~20小时。

6.根据权利要求1或2或3或5所述的一种制备抗菌鸡卵黄复合抗体的方法，其特征在于：所述步骤（4）中，对获得单种菌抗体原液进行效价检测的方法为ELISA法。

7.根据权利要求1~6任一项所述方法制备的一种抗菌鸡卵黄复合抗体，其特征在于：包括抗乙型溶血性链球菌鸡卵黄抗体、抗白色念珠菌鸡卵黄抗体、抗金黄色葡萄球菌鸡卵黄抗体、抗大肠杆菌鸡卵黄抗体。

8.根据权利要求7所述的一种抗菌鸡卵黄复合抗体，其特征在于：对抗菌鸡卵黄复合抗体效价进行检测，其中抗乙型溶血性链球菌鸡卵黄抗体效价≥1：32、抗白色念珠菌鸡卵黄抗体效价≥1：32、抗金黄色葡萄球菌鸡卵黄抗体效价≥1：16、抗大肠杆菌鸡卵黄抗体效价≥1：16。

9.权利要求1~8任一项所述抗菌鸡卵黄复合抗体在制备口腔致病菌感染引起的疾病的制剂中的应用。

10.权利要求1~8任一项所述的抗菌鸡卵黄复合抗体在制备预防和/或治疗口腔致病菌感染引起的相关疾病的消毒剂、药物、保健品、食品添加剂以及饲料添加剂中的应用。