[发明专利]一种螺旋藻类食品中微囊毒素的快速定量检测方法

权利要求书

1.一种螺旋藻类食品中微囊毒素的快速定量检测方法,其特征在于，包括以下步骤：

（1）样品前处理：取螺旋藻固体样品1-5g，置于碾钵中研碎后加提取溶剂，放入磁力搅拌器中搅碎，离心，沉淀后用GF/C滤纸过滤，再次加入提取液，重复提取3-5次，将提取液置于旋转蒸发仪上加温浓缩，得样品待测液备用；

（2）制备阳性对照液：取微囊毒素RR 和微囊毒素LR 标准品1-5g，加超纯水溶解配制成1.0ug/ml的阳性对照溶液备用；

（3）样品净化：将步骤（1）中制备的样品待测液加入HLB柱中进行富集，洗脱，收集洗脱液置于烧瓶中，于旋转蒸发仪上蒸干，再次富集，再次洗脱，并将洗脱液于旋转蒸发仪上蒸干，取蒸干后的样品加入3-5倍体积的甲醇，转入离心管中，加5-10ml纯化水溶解，离心，取上清液待测；

（4）HPLC-串接质谱法测定样品中微囊毒素的含量：将步骤（2）中配制好的1.0ug/ml的阳性对照溶液分别进行一级全扫描与二级全扫描机多反应检测，优化色谱条件与质谱条件，对步骤（3）中的待测上清液进行HPLC-串接质谱法测定。

2.根据权利要求1所述的一种螺旋藻类食品中微囊毒素的快速定量检测方法,其特征在于，步骤（1）中所述的螺旋藻固体样品剂型选自胶囊、片剂或精粉中的一种或多种。

3.根据权利要求1所述的一种螺旋藻类食品中微囊毒素的快速定量检测方法,其特征在于，步骤（1）中所述的提取溶剂的加入量为30-50ml。

4.根据权利要求1所述的一种螺旋藻类食品中微囊毒素的快速定量检测方法,其特征在于，步骤（1）中所述的提取溶剂选自冰醋酸或醇溶液中的一种或多种。

5.根据权利要求4所述的一种螺旋藻类食品中微囊毒素的快速定量检测方法,其特征在于，步骤（1）中所述的冰醋酸为体积浓度为5-10%的冰醋酸。

6.根据权利要求4所述的一种螺旋藻类食品中微囊毒素的快速定量检测方法,其特征在于，步骤（1）中所述的醇溶液为丁醇、甲醇、水的混合溶液，优选的，所述的丁醇、甲醇和水的体积比为（1-3）：（4-12）：（20-50）。

7.根据权利要求1所述的一种螺旋藻类食品中微囊毒素的快速定量检测方法,其特征在于，步骤（1）与步骤（3）中所述的离心速度为10000-12000r/min，离心时间为20-30min；步骤（1）中所述的加温温度为50-80℃。

8.根据权利要求1所述的一种螺旋藻类食品中微囊毒素的快速定量检测方法,其特征在于，步骤（3）中所述的洗脱过程具体为：先用20-30%的甲醇水溶液洗脱，再用90-100%的甲醇水溶液洗脱。

9.根据权利要求1所述的一种螺旋藻类食品中微囊毒素的快速定量检测方法,其特征在于，步骤（3）中再次洗脱过程具体为：先用浓度为10-20%的甲醇水溶液洗脱，再用60-70%的甲醇水溶液洗脱。

10.根据权利要求1所述的一种螺旋藻类食品中微囊毒素的快速定量检测方法,其特征在于，步骤（4）中的色谱条件为：流动相为0.3 %甲酸水溶液与乙腈的混合物，其中0.3 %甲酸水溶液与乙腈2-5的体积比为（1-3）：（2-5）；流速为0.4 mL/min； 色谱柱： Waters Acquity UPLC TM BEH C 18 ， 1.7μm， 2.1 mm×100 mm； 柱温： 40-45℃；样品盘温度：4 ℃；洗脱程序： 等度，80 % 的0.3 %甲酸水溶液，20 %乙腈； 进样量：5μL；质谱条件：仪器：Agilent 6460 型三重四极杆质谱仪；电离源模式： 电喷雾离子化；电离源极性： 正离子模式； 雾化气： 氮气； 雾化气压力： 50 -55psi； 毛细管电压： 3400 -3600V；干燥气温度：325 -340℃；干燥气流速： 5 L/min；鞘气温度：380-400 ℃；鞘气流速：12 L/min；监测方式：多反应监测。