[发明专利]EV713C蛋白酶作用靶点检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种EV71 3C蛋白酶作用靶点检测试剂盒，其特征在于：包括3C蛋白、多肽底物，以及酶解反应缓冲液，所述3C蛋白的序列如下，如SEQ ID NO.1所示：

GPSLDFALSLLRRNIRQVQTDQGHFTMLGVRDRLAVLPRHSQPGKTIWVEHKLVNVLDAVELVDEQGVNLELTLITLDTNEKFRDITKFIPENISTASDATLVINTEHMPSMFVPVGDVVQYGFLNLSGKPTHRTMMYNFPTKAGQCGGVVTSVGKVVGIHIGGNGRQGFCAGLKRSYFASEQ；

所述多肽底物为Dabcyl-EALFQGPPKFE-Edans，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，N端连接Dabcyl基团，C端连接Edans基团。

2.根据权利要求1所述的EV71 3C蛋白酶作用靶点检测试剂盒，其特征在于：所述酶解反应缓冲液为反应buffer液，其包括如下组分：25mM Tris-HCl，pH 8.0；200mM NaCl。

3.根据权利要求1或2所述的EV71 3C蛋白酶作用靶点检测试剂盒，其特征在于：包括以下物质：0.5uM 3C蛋白2ul；10uM多肽底物5ul；反应buffer液13ul。

4.一种利用权利要求1～3中任一项所述的EV71 3C蛋白酶作用靶点检测试剂盒进行检测的方法，其特征在于：将待检测化合物、3C蛋白加入到酶解反应缓冲液中，然后加入多肽底物，混匀，反应30min后，在336nm波长激发下，检测其在490nm处的荧光强度；若检测不到荧光，则表明该待检测化合物能抑制3C蛋白，具有抗EV71病毒能力；若能够检测到荧光，则表明该待检测化合物不能抑制3C蛋白。

5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于：多肽底物在336nm波长激发下，获得其在490nm处的荧光强度值A，表示未降解时的荧光强度；将3C蛋白多肽底物加入到反应buffer液后，混匀反应30min后，倒入玻璃比色皿中，在336nm波长激发下，获得其在490nm处的荧光强度值B，表示经降解后的荧光强度；在上述反应体系中加入一定浓度的待检测化合物，并重复以上步骤操作，获得化合物存在时的荧光强度C，通过比较A,B,C三值大小，确定待检测化合物对3C蛋白酶的酶活性的影响。