[发明专利]交联固定脂肪酶的超顺磁载体的制备方法

权利要求书

1.一种交联固定脂肪酶的超顺磁载体的制备方法，其特征在于经过下列各步骤：

（1）纳米磁性微球Fe₃O₄的制备：

将FeCl₃·6H₂O溶解于无水乙二醇中，配置成浓度为0.1～0.15mmol/mL的溶液，再按FeCl₃·6H₂O与处理剂的质量比为1:（4～6）加入处理剂，其中处理剂为乙酸钠和聚乙二醇，加入处理剂后使乙酸钠的浓度为80～120mg/mL，然后在200℃下恒温超声反应4～6h，待自然冷却后，用乙醇和去离子水洗涤数次，再经真空干燥即得纳米磁性微球Fe₃O₄；

（2）纳米磁性微球Fe₃O₄的包裹：

将步骤（1）所得纳米磁性微球Fe₃O₄与浓度为1mol/L的NaOH溶液混合，直至得到纳米磁性微球Fe₃O₄的浓度为4～8mg/mL的悬浮液，将悬浮液经超声波分散均匀，然后加入3倍悬浮液体积的无水乙醇、加入纳米磁性微球Fe₃O₄质量1/5～1/10的包埋剂以及加入悬浮液体积1/2的氨水，再在100℃下搅拌反应40min得到磁流体，然后将磁流体在1～2T的磁场条件下静置完成磁分离，再对磁流体进行固液分离，所得固体用乙醇和去离子水洗涤数次，即得包裹后的纳米磁性微球Fe₃O₄；

（3）纳米微球的功能化修饰：

按（0.2～0.8）:200的固液比g/mL计，将步骤（2）所得包裹后的纳米磁性微球Fe₃O₄超声分散于甲醇中，再按包裹后的纳米磁性微球Fe₃O₄与N-异丙基丙烯酰胺的质量比为（0.2～0.8）:4.05加入N-异丙基丙烯酰胺，按包裹后的纳米磁性微球Fe₃O₄与偶氮二异丁腈的质量比为（0.2～0.8）:0.15加入偶氮二异丁腈，得到反应体系，然后将反应体系置于氮气保护下以70℃反应12h，后将反应物置于沉淀剂中进行反复沉淀，直到无沉淀析出；将所得沉淀物进行真空干燥，即得到交联固定脂肪酶的超顺磁载体。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）或（2）中的乙醇和去离子水洗涤数次是指先用乙醇和去离子水交替洗涤数次后，再用去离子水洗涤。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）的包埋剂为正硅酸乙酯或海藻酸钾。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（3）的沉淀剂为乙醚或正己烷。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述无水乙二醇、乙酸钠、聚乙二醇、甲醇、N-异丙基丙烯酰胺、偶氮二异丁腈、正硅酸乙酯和海藻酸钾均为市购分析纯。

6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述正硅酸乙酯和海藻酸钾均为市购分析纯。

7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：所述乙醚和正己烷均为市购分析纯。