[发明专利]一种水蛭素冻干粉针剂的制备方法

权利要求书

1.一种水蛭素冻干粉针剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(A)取水蛭，加入注射用水，洗去杂质后破碎，制成匀浆；将匀浆分装于有盖容器中，于-30℃冰柜冻结20-24小时，再用乙醇解冻，再次冻结，反复冻、融3-5次，最后一次解冻后，加氯化钠溶液，搅拌，再用冷冻离心机离心沉淀，吸取上清液备用；

(B)将上清液进行超滤，超滤至原溶液体积的1/3-1/2时，加水至原体积，反复操作3-5次，合并透过液，20℃下浓缩至相对密度为1.05-1.10的溶液；

(C)将浓缩的过滤液用缓冲液调PH值为5.0-7.0，离子强度为0.01mol/l 通过阳离子交换柱，用缓冲液洗46倍的柱体积洗脱，收集洗脱液，再用缓冲液调PH值为5.0-7.0通过阴离子交换柱，分别用PH值为7.3-7.5、7.1-7.3的缓冲液各洗1倍柱体积，洗脱液弃去，最后用PH值为7.1-7.3的缓冲液加入0.01mol/l的氯化钠进行洗脱，收集洗脱液，洗脱至紫外检测器检测不到吸收为止；

(D)洗脱液浓缩脱盐，得到水蛭素半成品；

(E)将水蛭素半成品加或不加药用辅料，用注射用水调整浓度后，分装到西林瓶中，进行冷冻干燥，轧盖，检测，得到水蛭素冻干粉针剂。

2.根据权利要求1所述的水蛭素冻干粉针剂的制备方法，其特征在于：所述的步骤（A）中乙醇的浓度为70％-80％。

3.根据权利要求1所述的水蛭素冻干粉针剂的制备方法，其特征在于：所述的步骤（A）中氯化钠的加入量为原料的1-3倍，浓度为0.1-0.2mol/L。

4.根据权利要求1所述的水蛭素冻干粉针剂的制备方法，其特征在于：所述的步骤（C）中缓冲溶液为磷酸盐缓冲或者三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液的一种。

5.根据权利要求1所述的水蛭素冻干粉针剂的制备方法，其特征在于：所述的步骤（C）中阳离子交换柱选自CM-交联葡聚糖、CM-琼脂糖、CM-纤维素、SP-交联葡聚糖、SP-琼脂糖、SP-纤维素中的一种。

6.根据权利要求1所述的水蛭素冻干粉针剂的制备方法，其特征在于：所述的步骤（C）中阴离子交换柱选自DEAE-交联葡聚糖、DEAE-琼脂糖、DEAE-纤维素、Q-交联葡聚糖、Q-琼脂糖、Q-纤维素中的一种。

7.根据权利要求1所述的水蛭素冻干粉针剂的制备方法，其特征在于，所述的步骤（D）中浓缩脱盐采用透析袋浓缩法，具体操作为：

将洗脱液放入透析袋，结扎，把高分子聚合物聚乙二醇（碳蜡）、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖中的一种撒在透析袋外即可；或者将吸水剂配成30％－40％浓度的溶液，将装有洗脱液的透析袋放入即可，吸水剂用过后，放入温箱中烘干或自然干燥后，循环使用。