[发明专利]糖蛋白的产生

权利要求书

1.在细胞培养物中产生糖蛋白的方法，其包括：

将含有编码目的糖蛋白的基因的哺乳动物细胞在包含约10nM到600nM锰的细胞培养基中培养，培养的条件和时间足够允许表达所述糖蛋白，其中所表达的糖蛋白的糖基化模式比在缺少锰的其他方面相同的培养基中在其他方面相同条件下观察到的糖基化模式更广泛。

2.权利要求1的方法，其包括步骤：

在包含约10nM到600nM锰的细胞培养基中培养含有编码目的糖蛋白的基因的哺乳动物细胞；

在第一个温度范围保持培养物第一个时间期限，所述第一个时间期限足够允许细胞再生至如果培养物保持在第一个温度范围时最大可能的活细胞密度的约20％-80％范围内的活细胞密度；

将培养物转换到第二个温度范围，其中第二个温度范围的至少一个温度低于第一个温度范围的最低温度；

在足够允许所述糖蛋白表达的条件和时间内保持培养物第二个时间期限，其中所表达的糖蛋白的糖基化模式比在缺少锰的其他方面相同的培养基中在其他方面相同条件下观察到的糖基化模式更广泛。

3.权利要求2的方法，其中第一个温度范围包含约30到42℃的温度范围。

4.权利要求3的方法，其中第一个温度范围包含约37℃的温度。

5.根据权利要求2到4任一项的方法，其中所述第二个温度范围包含约25到41℃的温度范围。

6.权利要求5的方法，其中所述第二个温度范围包含约31℃的温度。

7.根据权利要求2到6任一项的方法，其还包含第一个转换步骤后的第二个转换步骤，该第二个转换步骤包括将培养物转换到第三个温度或温度范围，其中第三个温度范围的至少一个温度低于第二个温度范围的最低温度。

8.权利要求7的方法，其中第三个温度范围包含约25到40℃的温度范围。

9.根据权利要求1到8任一项的方法，其中所述细胞培养基包含约20到200nM锰。

10.权利要求9的方法，其中所述细胞培养基包含约40nM锰。

11.根据权利要求1到10任一项的方法，其中细胞培养基包含最初浓度小于或等于约8mM的谷氨酰胺。

12.权利要求11的方法，其中所述细胞培养基的最初谷氨酰胺浓度小于或等于约4mM。

13.根据权利要求1到12任一项的方法，其中所述细胞培养物的体积为至少约500L。

14.根据权利要求1到13任一项的方法，其中最初的细胞培养开始后进一步为细胞培养物提供补料培养基。

15.根据权利要求1到14任一项的方法，其中进一步为细胞培养物提供补充组分。

16.权利要求15的方法，其中所述补充组分选自激素和/或其他生长因子、无机离子、缓冲剂、维生素、核苷或核苷酸、微量元素、氨基酸、脂类、葡萄糖或其他能源，和其组合。

17.权利要求16的方法，其中为所述细胞培养物补充约2克/升的葡萄糖。

18.根据权利要求1到17任一项的方法，其中所述细胞培养基是确定成分培养基。

19.根据权利要求1到18任一项的方法，其中目的糖蛋白包含凝血因子IX。

20.权利要求19的方法，其中凝血因子IX是重组人凝血因子IX。

21.根据权利要求1到18任一项的方法，其中目的糖蛋白包含抗ABeta抗体。

22.权利要求21的方法，其中抗ABeta抗体是单克隆抗体。

23.权利要求22的方法，其中抗ABeta抗体是人源化的抗ABeta肽IgG1单克隆抗体。

24.包含约10到600nM锰的细胞培养基。

25.权利要求24的细胞培养基，其包含约20到200nM锰。

26.权利要求25的细胞培养基，其包含约40nM锰。

27.根据权利要求24到26任一项的细胞培养基，其中细胞培养基包含最初浓度小于或等于约8mM的谷氨酰胺。