[发明专利]一种固液结合制备利拉鲁肽的方法

权利要求书

1.一种固液结合制备利拉鲁肽的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(a)Boc-Glu(OSu)-OtBu和Fmoc-Lys-OH在碱性溶液下偶联生成二肽单体Fmoc-Lys(N-ε-(γ-Glu(N-α-Boc)-OtBu)-OH；具体操作为：将Fmoc-Lys-OH或其盐与碱A按照摩尔比1:1～2的比例溶解在水中，加入5～20％体积的有机溶剂B助溶，待完全溶解后，以Fmoc-Lys-OH的量计，搅拌下滴加入1～1.2倍摩尔量Boc-Glu(OSu)-OtBu的有机溶剂B溶液；继续搅拌反应，TLC监测反应终点，反应结束后，减压蒸掉有机溶剂，加入10％柠檬酸水溶液调溶液pH值至2～3，乙酸乙酯萃取，析晶得Fmoc-Lys(N-ε-(γ-Glu(N-α-Boc)-OtBu)-OH；

(b)以Wang树脂或CTC树脂为固相载体，采用Fmoc化学保护策略，按照利拉鲁肽肽序，依次与Fmoc保护氨基酸合成N端三氟乙酰化的全保护肽树脂，其中Fmoc保护氨基酸26位Lys采用的是单体Fmoc-Lys(N-ε-(γ-Glu(N-α-Boc)-OtBu)-OH，24位和25位采用Fmoc-Ala-Ala-OH，其他位点均采用常规的Fmoc保护氨基酸偶联；N端三氟乙酰化的全保护肽树脂结构如下：

Tfa-His(Trt)-Ala-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Val-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Leu-Glu(OtBu)-Gly-Gln(Trt)-Ala-Ala-Lys(N-ε-(γ-Glu(N-α-Boc)-OtBu)-Glu(OtBu)-Phe-Ile-Ala-Trp(Boc)-Leu-Val-Arg(Pbf)-Gly-Arg(Pbf)-Gly-树脂；

(c)用裂解试剂裂解肽树脂得到三氟乙酰化的未修饰的利拉鲁肽，并经纯化，得到精肽：

Tfa-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys(γ-Glu-OH)-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly-OH；

(d)在碱性条件下，Pal-OSu与步骤(c)所得三氟乙酰化的未修饰的利拉鲁肽精肽发生偶联反应，得到棕榈酸修饰的产物；

(e)经碱解、纯化、冻干得到利拉鲁肽；

所述碱A为碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸氢钾、碳酸钾、三乙胺、二乙胺、N-乙基二异丙基胺、N,N-二异丙基乙胺等中的一种；所述有机溶剂B为四氢呋喃、二氧六环、N,N-二甲基甲酰胺、丙酮、N-甲基-2-吡咯烷酮、乙腈中的一种或一种以上的混合液。

2.根据权利要求1所述的固液结合制备利拉鲁肽的方法，其特征在于，步骤(b)中N端三氟乙酰化的全保护肽树脂的具体制备方法为：以Wang树脂或CTC树脂为固相载体，以合成规模的物质量计，以2-5倍的投料比加入相应的Fmoc保护氨基酸进行偶联反应，每一个偶联反应均是在缩合剂的存在下进行的固相接肽反应，反应完毕后用脱保护试剂脱除Fmoc，再与下一个Fmoc保护氨基酸进行偶联反应；重复操作直至合成至1位His后，用三氟乙酸酐封端，得到N端三氟乙酰化的全保护肽树脂Tfa-His(Trt)-Ala-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Val-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Leu-Glu(OtBu)-Gly-Gln(Trt)-Ala-Ala-Lys(N-ε-(γ-Glu(N-α-Boc)-OtBu)-Glu(OtBu)-Phe-Ile-Ala-Trp(Boc)-Leu-Val-Arg(Pbf)-Gly-Arg(Pbf)-Gly-树脂。

3.根据权利要求2所述的固液结合制备利拉鲁肽的方法，其特征在于，Wang树脂或CTC树脂的替代度为0.3-0.5mmol/g。