[发明专利]外源基因转化浮萍并进行表达的方法

权利要求书

1.一种外源基因转化浮萍并进行表达的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一：将外源基因pcambia-1300-GFP双元质粒转化至农杆菌EHA 105中，获得重组农杆菌；然后配制农杆菌重悬液；所述农杆菌重悬液的配制步骤为：挑取重组农杆菌单菌落在YEB固体培养基上活化；活化完成后的重组农杆菌单菌落再接种到YEB液体培养基中，26~30℃生长过夜，获得重组农杆菌菌液；然后按照体积比为1:50~100将所述重组农杆菌菌液接种于含有50 mg/L卡那霉素，10 mg/L利福平和20 mg/L乙酰丁香酮的YEB液体培养基中形成接种液，于26~30℃振摇至使所述接种液在波长为600 nm的吸光度值为1.0；最后将所述接种液重悬于含3%蔗糖，20 mg/L乙酰丁香酮和0.6 M甘露醇的1/2 MS液体培养基中，得到农杆菌重悬液；

步骤二：在所述浮萍叶状体区域割划若干处，然后将所述割划后的浮萍叶状体在所述农杆菌重悬液中浸泡10-15 min，通过所述重组农杆菌将所述外源基因生长到所述浮萍叶状体中；然后将所述浮萍叶状体移植入铺有无菌滤纸的共培养基中，室温下避光培养3天以上；所述共培养基为含3%蔗糖、20 mg/L乙酰丁香酮、0.5 mg/L 6-苄基嘌呤的1/2 MS固体培养基。

2.根据权利要求1所述的表达的方法，其特征在于，所述步骤二还包括对浮萍的预处理：在SH培养基含1%蔗糖和10 μM吲哚乙酸中于20~25℃，在光生物反应器中16 h光照/8 h黑暗，40 μmol/m²·sec预培养2周以上。

3.根据权利要求1所述的表达的方法，其特征在于，还包括一正交试验，即选用抗生素水溶液，浓度分别为0、5、10、20和40 mg/L；每个浓度处理若干组浮萍叶状体，重复若干次；植物激素水溶液，浓度分别各为0、0.5、1、2和5 mg/L；每个浓度处理若干组浮萍叶状体，重复若干次，通过分析极差值找出未经过转化的浮萍在抗生素、植物激素影响下的最佳生长条件。

4.根据权利要求1-3任一项所述的表达的方法，其特征在于，所述农杆菌重悬液中所述重组农杆菌的浓度为1×10⁸ cfu/mL~1×10⁹ cfu/mL。