[发明专利]一种达巴万星的分离纯化方法

说明书

本发明提供了一种高效分离纯化达巴万星的方法，包括以下步骤，将达巴万星粗提取物进行溶解、过滤；将上述过滤后的粗溶液上样到装有聚苯乙烯高分子聚合物微球的层析柱中进行层析；采用磷酸水溶液和有机溶剂作为流动相对目标产物进行梯度洗脱；分段收集目的峰值的溶液，对符合要求的组份液进行汇总。本发明分离方法简单，可规模化生产，回收率高且稳定。

技术领域

本发明涉及药物纯化领域，特别是一种高效分离纯化达巴万星的方法。

背景技术

达巴万星(Dalbavancin)是新型半合成糖肽类抗生素，其作用机制与万古霉素和替考拉宁相同，通过抑制G+菌细胞壁的生物合成，可被广泛用作治疗皮肤和软组织感染的药物。达巴万星具有独特的药动学性质，半衰期长，可每周间隔用药，且能代谢完全。目前，达巴万星在治疗导管相关的血源性感染以及皮肤和软组织感染已取得了良好的效果，其具有优良的体内抗菌活性和安全性，是理想的第二代糖肽抗生素。

达巴万星由结构相近的A₀、A₁、B₀、B₁和B₂五种成分组成，其中B₀是其主要成分，这五种成分具有相同的母核结构。根据美国发明专利US 20120184497 A1的报道，达巴万星作为抗菌药使用时，其主要成分B₀要求应不低于75％。达巴万星是由放线菌代谢产物A40926经过氨基葡萄糖醛酸上的羧基酯化、38位羧基酰胺化、酯水解得到。达巴万星的结构式如下：

目前国内外专利、文献等对达巴万星的分离纯化方法鲜有报道。在国内，目前达巴万星不存在化合物制备、分离相关的专利，仅存在三篇制剂或组合物相关的专利CN200380103406.2、CN200710140471.2和CN200380103406.2。因此有必要对达巴万星的分离、纯化和制备做更进一步的研究。

发明内容

本发明的目的在于提供一种高效分离纯化达巴万星的方法，仅需一步层析纯化即可满足达巴万星主要组份B₀含量高于75％的要求，纯化收率高而稳定，同时本发明分离方法简单方便，可用于规模化生产，大大降低生产成本。

为达到上述目的，本发明的技术方案如下：一种达巴万星的分离纯化方法，其特征在于，将达巴万星粗提取物进行溶解、过滤；将上述过滤后的达巴万星溶液上样到装有聚苯乙烯高分子聚合物微球的层析柱中进行层析；采用磷酸水溶液和有机溶剂作为流动相对达巴万星溶液进行梯度洗脱；分段收集目的峰值的达巴万星溶液，对符合要求的组份液进行汇总。

优选的，所述聚苯乙烯高分子聚合物微球为单分散的、具有孔道结构的微球。

优选的，所述微球的型号可以是或

优选的，达巴万星粗提取物溶解于10％-20％的酸性甲醇溶液中，其溶液pH值控制在2-5。

优选的，磷酸水溶液中含有0.1％的磷酸。

优选的，有机溶剂可以为甲醇、乙醇、乙腈、丙酮、异丙醇。

优选的，上样前，对层析柱进行柱前预处理，先高浓度有机相进行除杂，后用浓度低于20％的有机相进行平衡。

优选的，所述梯度洗脱过程为，先用甲醇含量为40-50％的流动相冲洗5-10个柱体积脱前杂，再用甲醇含量为45-55％的流动相冲洗6-10个柱体积洗脱主峰，最后用甲醇含量为65-75％的流动相冲洗2-4个柱体积洗脱后杂。