[发明专利]一种DNA催化循环网络诱导的DNA‑纳米金组装方法及其在单碱基突变检测中的应用

权利要求书

1.一种DNA催化循环网络诱导DNA-纳米金组装的试剂盒，其中包括：

1)DNA底物链，所述DNA底物链由连接链和保护链杂交而成，其中所述连接链从5’端到3’端依次由区域1、区域2、区域3、区域4、区域5连接而成，所述保护链从3’端到5’端依次由任选的区域a*、区域2*、区域3*、区域4*、区域6*连接而成，其中，区域2、区域3、区域4组成的连接链中间部分与区域2*、区域3*、区域4*组成的保护链中间部分完全互补，保护链除任选的区域a*和区域2*外的其它部分与目标链互补，区域6*为触发DNA链替换反应的粘性末端；

2)燃料链，所述燃料链为与保护链互补的单链DNA，其中所述燃料链的两端分别含有碱基错配，所述碱基错配的位置是燃料链中区域2和区域4部分与区域3相连部分的第一个碱基，并且，其中所述燃料链两端与保护链互补的粘性末端分别增加1-3个碱基，形成区域a和区域b；

3)连接有纳米金1的DNA双链1和连接有纳米金2的DNA双链2，其中，所述DNA双链1由纳米金连接链1和纳米金保护链1杂交而成，所述DNA双链2由纳米金连接链2和纳米金保护链2杂交而成，所述纳米金连接链1从3’端到5’端依次由区域7*、区域1*、区域2*连接而成，所述纳米金保护链1由区域1组成，所述纳米金连接链2从3’端到5’端依次由区域4*、区域5*、区域8*连接而成，所述纳米金保护链2由区域5组成，其中，所述DNA双链1和所述DNA双链2分别通过区域7*或区域8*与连接有区域7或区域8的纳米金1和纳米金2相连，并且DNA双链1中的纳米金连接链1的区域1*和区域2*与步骤1)所述连接链的区域1和区域2互补，DNA双链2中的纳米金连接链2的区域4*和区域5*与步骤1)所述连接链的区域4和区域5互补；

其中区域1与区域1*、区域2与区域2*、区域3与区域3*、区域4与区域4*、区域5与区域5*、区域6与区域6*、区域7与区域7*、区域8与区域8*分别完全互补。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，所述目标链的长度范围在10-50个碱基之间。

3.一种DNA催化循环网络诱导DNA-纳米金组装的方法，所述方法包括以下步骤：

1)根据需要检测的DNA目标链来设计权利要求1-2任一项所述试剂盒中的各条链的DNA序列；

2)使用步骤1)中获得的试剂盒中的各条链在DNA目标链样品中完成DNA-纳米金的组装。

4.一种检测DNA单碱基突变的方法，所述方法包括如下步骤：

1)根据需要检测的DNA目标链来设计权利要求1-2任一项所述试剂盒中的各条链的DNA序列；

2)使用步骤1)中获得的试剂盒中的各条链在DNA目标链和突变链样品中完成DNA-纳米金的组装；

3)根据DNA-纳米金组装的紫外动力学过程和颜色差异检测DNA单碱基突变。

5.根据权利要求3或4所述的方法，其中燃料链与底物链的摩尔比在5：1到10：1之间。

6.根据权利要求3或4所述的方法，其中所述DNA-纳米金的组装在PBS缓冲液中进行。

7.根据权利要求4所述的方法，其中所述单碱基突变包括错配、插入和删除。