[发明专利]尼古丁降解菌Pseudomonas sp.MHJY8及其筛选方法和应用

权利要求书

1.一种尼古丁降解菌，其特征在于，所述尼古丁降解菌为尼古丁降解菌Pseudomonassp.MHJY8，保藏时间为2015年1月27日，保藏于中国典型培养物保藏中心，编号为CCTCCNO：M2015072。

2.一种尼古丁降解菌的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤，

尼古丁降解菌初筛：称取土壤样品5g，无菌操作加入装有45ml生理盐水和玻璃珠的250ml锥形瓶中，震荡30min，使样品中的菌体均匀分散，静置30s使其自然沉淀，取上层菌悬液进行10倍系列梯度稀释至10^-6，取0.1ml稀释度为10^-3～10^-6的稀释液分别涂布于尼古丁降解菌初筛培养基，于30℃倒置培养48h；

尼古丁降解菌初筛菌株划线纯化：用接种环从所述尼古丁降解菌初筛培养基中挑取单菌落，在同一所述尼古丁降解菌初筛培养基上进行划线纯化，连续进行3次，将纯化菌株接种于LB斜面培养基上，4℃保藏。

3.如权利要求2所述的尼古丁降解菌的筛选方法，其特征在于，所述尼古丁降解菌初筛培养基为取酵母提取物2g，山药4g，K₂HPO₄13g，KH₂PO₄4g，(NH₄)₂SO₄0.2g，NaCl5g，琼脂粉20g，微量元素混合液10ml，蒸馏水定容至1000ml，培养基121℃条件下高压蒸汽灭菌20min，冷却至50℃时，无菌操作条件下用0.22μm滤膜规格的针头过滤器加入尼古丁1g，混匀，即得。

4.如权利要求3所述的尼古丁降解菌的筛选方法，其特征在于，所述微量元素混合液为取MgSO₄·7H₂O1g，MnSO₄·H₂O0.4g，CuCl₂·2H₂O0.2g，CaCl₂·2H₂O0.2g，FeSO₄·7H₂O0.02g全部溶解于70ml0.1mol/LHCl溶液中，定容至100ml，即得。

5.如权利要求2-4任一项所述的尼古丁降解菌的筛选方法，其特征在于，所述尼古丁降解菌液体培养基为不加琼脂的尼古丁降解菌初筛培养基。

6.如权利要求2所述的尼古丁降解菌的筛选方法，其特征在于，所述LB斜面培养基为取胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCl5g，先用900ml蒸馏水溶解，然后用5mol/LNaOH溶液将pH调至7.0，再用蒸馏水定容至1000ml。

7.如权利要求2所述的尼古丁降解菌的筛选方法，其特征在于，所述尼古丁降解菌包括权利要求1所述的尼古丁降解菌Pseudomonassp.MHJY8。

8.一种权利要求1所述的尼古丁降解菌的应用，其特征在于，所述的尼古丁降解菌Pseudomonassp.MHJY8用于降解尼古丁。