[发明专利]一种镇痛活性多肽的制备方法

权利要求书

1.一种镇痛活性多肽的制备方法，其特征在于，包含以下步骤：

（1）优化植物抗菌肽PaAMP1基因序列；

（2）合成优化后的PaAMP1基因，经BamHI/HindIII双酶切后，连入经同样酶切的原核表达载体pET-32a，得到重组质粒pET-32a-PaAMP1，将重组质粒导入宿主菌，得到基因工程菌株；所述优化后的PaAMP1基因的序列为SEQ ID NO.1，其编码的蛋白质序列为SEQ ID NO.2；

（3）将得到的基因工程菌株接种于含氨苄青霉素的LB培养基震荡培养，经IPTG诱导后高效表达产生可溶性重组PaAMP1；

（4）用镍离子亲和层析纯化后获得重组活性多肽PaAMP1。

2.根据权利要求1所述的一种镇痛活性多肽的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述植物为美洲商陆。

3.根据权利要求1所述的一种镇痛活性多肽的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述优化是根据大肠杆菌密码子使用频率对植物抗菌肽PaAMP1基因进行密码子优化。

4.根据权利要求1所述的一种镇痛活性多肽的制备方法，其特征在于，步骤（2）中所述宿主菌为大肠杆菌Origami（DE3）菌株感受态细胞。

5.根据权利要求1所述方法获得的重组活性多肽PaAMP1在制备镇痛药物中的应用。