[发明专利]一种通过分离纯化测定黄酒酵母生长曲线的方法

权利要求书

1.一种通过分离纯化测定黄酒酵母生长曲线的方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）分离纯化的步骤：

a、取保藏菌株，在麦芽汁加2％琼脂灭菌平板上划线分离，30℃培养两天，再重复划线分离一次，然后转接到相同培养基的斜面上，于冰箱中保藏；

b、取斜面中菌株接入250mL灭菌麦汁中，100rpm、温度30℃摇床培养每隔2小时取样5mL，其中1mL用测定吸光度法确定生长曲线，另外4mL用于菌体干重法确定生长曲线；

（2）吸光度的测定：取样1mL稀释20倍于620m处测定吸光度，以同样稀释度的麦汁作为空白；

所述的测定方法为菌体干重法：离心管编号干燥称重，取样4mL于4000rpm离心5分钟，弃去上清夜，稀盐酸洗涤菌体，离心后继续用蒸馏水洗涤离心，于50℃烘干10小时称重；

（3）加入各组分于25mL比色管中，定容至25mL，沸水浴5分钟，冷却到室温，于520m下测定吸光度；

吸光度与标准葡萄糖浓度的线性表达式为y=1.2289X-0.4568，

R2=0.9966，X为标准葡萄糖浓度(mg/mL)，y为吸光度；

（4）接种酵母于170ml麦芽汁培养基中，同时做一空白对照，30℃培养，以此为起始时间，记录起始溶液的细胞数，并在培养，2，4，6，8，10， 12，14，16，20，22，24小时测定酵母菌在660nm处的吸光值；然后以酵母菌细胞吸光质作纵坐标，生长时间作横坐标，绘制生长曲线。