[发明专利]一种通过分离纯化测定黄酒酵母生长曲线的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种通过分离纯化测定黄酒酵母生长曲线的方法，属于黄酒酿造的技术领域。

背景技术

酵母不仅是黄酒酿造中的糖化剂，小部分发酵剂，同时还赋予黄酒独特的风味。由于酵母在黄酒酿造中占有极其重要的地位，其质量的优劣，直接影响到黄酒的质量和产量，因此被形象地喻为 “酒之骨”。因此，准备测定酵母的生长曲线、掌握酵母的生产状态是十分必要的。本发明由此产生。

发明内容

针对现有技术的上述技术问题，本发明的目的是提供一种通过分离纯化测定黄酒酵母生长曲线的方法，准确测定酵母的生长曲线、掌握酵母的生产状态，为酿造优质黄酒奠定基础。

为达到上述目的，本发明是通过以下技术方案实现的：

一种通过分离纯化测定黄酒酵母生长曲线的方法，包括以下步骤：

（1）分离纯化的步骤：

a、取保藏菌株，在麦芽汁加2％琼脂灭菌平板上划线分离，30℃培养两天，再重复划线分离一次，然后转接到相同培养基的斜面上，于冰箱中保藏；

b、取斜面中菌株接入250mL灭菌麦汁中，100rpm、温度30℃摇床培养每隔2小时取样5mL，其中1mL用测定吸光度法确定生长曲线，另外4mL用于菌体干重法确定生长曲线；

（2）吸光度的测定：取样1mL稀释20倍于620m处测定吸光度，以同样稀释度的麦汁作为空白；

所述的测定方法为菌体干重法：离心管编号干燥称重，取样4mL于4000rpm离心5分钟，弃去上清夜，稀盐酸洗涤菌体，离心后继续用蒸馏水洗涤离心，于50℃烘干10小时称重；

（3）加入各组分于25mL比色管中，定容至25mL，沸水浴5分钟，冷却到室温，于520m下测定吸光度；

吸光度与标准葡萄糖浓度的线性表达式为y=1.2289X-0.4568，

R²=0.9966，X为标准葡萄糖浓度(mg/mL)，y为吸光度；

（4）接种酵母于170ml麦芽汁培养基中，同时做一空白对照，30℃培养，以此为起始时间，记录起始溶液的细胞数，并在培养，2，4，6，8，10， 12，14，16，20，22，24小时测定酵母菌在660nm处的吸光值；然后以酵母菌细胞吸光质作纵坐标，生长时间作横坐标，绘制生长曲线。

本发明的有益效果如下：

本发明一种通过分离纯化测定黄酒酵母生长曲线的方法，能够准确测定酵母的生长曲线、掌握酵母的生产状态，为酿造优质黄酒奠定基础。

附图说明

图1为本发明的酵母的生长曲线图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，但本发明的保护范围并不限于此。

本发明通过分离纯化测定黄酒酵母生长曲线的方法，包括以下步骤：

（1）分离纯化的步骤：

a、取保藏菌株，在麦芽汁加2％琼脂灭菌平板上划线分离，30℃培养两天，再重复划线分离一次，然后转接到相同培养基的斜面上，于冰箱中保藏；

b、取斜面中菌株接入250mL灭菌麦汁中，100rpm、温度30℃摇床培养每隔2小时取样5mL，其中1mL用测定吸光度法确定生长曲线，另外4mL用于菌体干重法确定生长曲线；

（2）吸光度的测定：取样1mL稀释20倍于620m处测定吸光度，以同样稀释度的麦汁作为空白；

所述的测定方法为菌体干重法：离心管编号干燥称重，取样4mL于4000rpm离心5分钟，弃去上清夜，稀盐酸洗涤菌体，离心后继续用蒸馏水洗涤离心，于50℃烘干10小时称重；

（3）按下表1加入各组分于25mL比色管中，定容至25mL，沸水浴5分钟，冷却到室温，于520m下测定吸光度；

吸光度与标准葡萄糖浓度的线性表达式为y=1.2289X-0.4568，

R²=0.9966，X为标准葡萄糖浓度(mg/mL)，y为吸光度；

（4）接种酵母于170ml麦芽汁培养基中，同时做一空白对照，30℃培养，以此为起始时间，记录起始溶液的细胞数，并在培养，2，4，6，8，10， 12，14，16，20，22，24小时测定酵母菌在660nm处的吸光值；然后以酵母菌细胞吸光质作纵坐标，生长时间作横坐标， 制得如图1所示的生长曲线。

本发明一种通过分离纯化测定黄酒酵母生长曲线的方法，能够准确测定酵母的生长曲线、掌握酵母的生产状态，为酿造优质黄酒奠定基础。

上述实施例仅用于解释说明本发明的发明构思，而非对本发明权利保护的限定，凡利用此构思对本发明进行非实质性的改动，均应落入本发明的保护范围。